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病毒的分离培养  一 病料的准备 1 病料的采取;一般在发病初期和中期采取的病料容易分离到病毒， 根据所怀疑的疾病来采取病料，因为不同种类的病毒在不同的组织中的含量不同，如鸡瘟病毒在脑组织含量最多，故取病料一般取鸡头，如猪瘟取脾，淋巴结等。 结冰保存或放80％甘油磷酸缓冲液保存。 2 病料的处理 首先将材料剪成小块，放在无菌的碾钵内磨碎，加5―10倍灭菌生理盐水，制成病毒悬液（组织悬液）可加双抗除菌，每ml悬液中加青霉素100－200单位链霉素100mg。作用1小时以上再接种。也可用细菌过滤器除菌。 二 接种动物 常用的试验动物有小白鼠、家兔、豚鼠、鸡、鸭。 接种动物的目的： （1）从污染的病料或细菌与病毒混合感染的病料中分离病毒以除去杂菌， （2）接种动物可以观察临床症状和病理变化进行综合诊断。小鼠腹腔注射_高清.mp4 三 接种鸡胚 凡是禽类的病毒都可以在鸡胚里繁殖，还有许多哺乳动物的病毒，也可在鸡胚里生长，因此鸡胚较常用，鸡胚接种的方法及注意事项在实验课中介绍。 病毒分离培养细胞培养法_标清.mp4 接种鸡胚的优点： （ 1）鸡蛋来源充足，价格低廉。 （ 2）技术简单，不需要特殊设备和条件 其缺点： （1）很少死亡，不产生特征 2）要进行多项实验才能鉴定。 四 、 组织培养 1、 原代细胞培养 如鸡胚细胞，兔肾细胞，猪胃，牛肾细胞等，如鸡胚细胞，把鸡胚培养9天，取鸡胚，去头，去腿，剪碎，用消化液把细胞一个个分开，去消化液（用培养液反复冲洗），计算细胞，每ml培养液中含1万左右，放入无菌培养液中培养2－3天就可长满。 2、 继代细胞培养 用长好的原代细胞再继续培养。以上细胞都可作为继代细胞培养。 3、传代细胞培养 是染色体异常的多倍体细胞（癌细胞的培养）可一代代传下去，如Hela细胞培养的基本原理是细胞以动物体分离后不一定死亡，在一定的营养条件下可生长繁殖。 用 途： （1）病毒的毒价测定； 毒价是能够引起 细胞病变的最高稀释度。如病毒稀释成 10 倍，每稀释度接种3－5瓶。 （2） 空斑实验 ：测定病毒的特性是否 出现空斑或根据病毒在细胞出现空斑 形态大小来鉴别病毒。 （3）中和试验 ； 把一定量病毒与抗血清中和，再接种细胞，可测定未知病毒或检出抗体。 （4）制造抗原 ； 用于诊断疾病。 （5）制造疫苗； 如鸡新城疫疫苗，猪瘟疫苗等。 （6）进行血清学试验 ； 如荧光抗体，酶标抗体等。细胞培养技术.flv