一阶导数停流法测定还原型谷胱甘肽的方法研究 - Core.PDF

27 卷 增刊 福州大学学报(自然科学版) Vol.27 1999 年9 月 Journal of Fuzhou Univer ity(N atural Science) Sep.1999 文章编号:1000-2243 (1999)S0-0242-03 一阶导数停流法测定还原型谷胱甘肽的方法研究 1 2 2 游文玮, 刘 彦, 王尊本 (1. 一军医大学基础部, 广东 广州 5 105 15;2.厦门大学化学系, 福建 厦门361005) 摘要:还原型谷胱甘肽(GSH)在新亚铜试剂存在下能被Cu2+氧化而产生Cu+络合物, 该络合物在 454nm 处有特征吸收.采用导数动力学分光光度法间接测定G SH.系统研究了导数动力学方法的 实验条件, 并对流动注射装置进行改进, 保证导数光谱峰高的准确测量.实验结果表明, 加入导 数技术可基本消除因采样时间不准给流动注射方法带来的误差. 关键词:导数光度法;催化动力学;分光光度法;停流法;还原型谷胱甘肽 中图分类号:O657.3　　　　　　　　　文献标识码:A 谷胱甘肽(GSH )是人体中许多新陈代谢过程所必需的物质, 它能非酶化还原过氧化物、 自由基等膜物质.通过谷胱甘肽转移酶的作用, 谷胱甘肽能与非生命物质或亲电物质结合, 起解毒作用.在谷胱甘肽过氧化物酶的催化下, 还原态的谷胱甘肽能清除血红细胞中的过氧 化氢.谷胱甘肽的测定方法很多, 有滴定法、 分光光度法、 荧光光度法和酶催化法〔1～4〕等. 本文采用导数动力学方法对GSH 进行定量分析.结果表明, 加入导数技术后方法的重现性 好, 精密度高, 线性范围宽, 简单快速. 图1　停流法动力学曲线　　　　　　　　　　　　图2　一阶导数光谱 1 　原理 　　导数分光光度法是利用反应速率随时间变化率与反应物或产物的浓度之间的定量关系, 通过测量与反应速率成比例关系的吸光度随时间的变化率 (即导数峰的高度值h ), 从而求 出待测物的含量.图1表示本体系以停流法测得的动力学曲线, 图2 是由图1 变换得到的一 收稿日期:1999-05-3 1　　 作者简介:游文玮 (1962-), 男, 副教授. 增刊 游文玮等:一阶导数停流法测定还原型谷胱甘肽的方法研究 ·243 · 阶导数光谱曲线.因为dA /d t = (dA /dλ)× (dλ/d t ), dλ/d t 可控制恒定, 故dA/d t 与 dA /dλ成比例关系, 也就与待测物的含量具有比例关系, 借此可以进行定量分析.本文利 用下列反应: 2+ + Cu +GSH=Cu +GSSG + 用新亚铜试剂与Cu 反应形成具有特定吸收波长的稳定络合物, 测定该络合物, 便能间接 求出谷胱甘肽的含量. 2 　实验部分 　　1)主要仪器　美国Beckman DU-7HS 型分光光度计;日本 HM -20E 型酸度计;LZ -10 10 型蠕动泵;LZ -1020 型采样阀. 2)试剂　1.00g/L GSH标准溶液:50.00mg GSH溶于二次蒸馏水中, 在50mL 容量瓶中定 容, 避光存放, 当日现配.10mmol/L新亚铜试剂贮液:0.2173g 新亚铜试剂, 滴加0.05mol/L H SO , 用二次蒸馏水溶解, 于100mL 的容量瓶中定容, 随后于低温冷藏.50mmol/L CuSO 2 4 4 溶液.缓冲溶液:0.1mol/L NaAc-HAc (pH ∶3.50)缓冲溶液;0.01mol/L NaH PO -Na