免疫技术.PPT

（4）干扰素（TNF）的检测。TNF测定主要应用于炎症性疾病和感染性休克等机制的研究，也用于对肿瘤患者预后判断及疗效考核。此外，检测器官移植者血浆与尿液内TNF含量也可作为一种移植免疫生物学指标和排斥反应的早期指征。目前TNF检测方法是选取原代肿瘤细胞或肿瘤细胞株、小鼠纤维母细胞L929株等作为靶细胞，定量后与TNF标本共同孵育。经一定时间后，用显微镜直接观察细胞活性，或以染料染色后鉴定细胞活性，计算出细胞毒作用百分率。以50% 细胞毒作用的效价作为TNF的抗瘤活性单位。也有在孵育后的细胞培养液中加入MTT，通过溶解细胞后，以比色法测定蓝色颗粒来推知TNF的活性单位。 （5）肿瘤坏死因子（IFN）的检测。IFN测定除可确定临床使用的IFN制剂的含量外，测定血清内IFN水平或测定受体PHA刺激后淋巴细胞产生IFN的水平，均可反映机体细胞免疫的状态。临床研究发现，IFN的产生能力和血清含量与某些变态反应性疾病的发病机制有一定联系，也与肿瘤的预后相关。此检测也可应用于中药诱生干扰素的能力，以测定中药作用原理。 测定IFN的经典方法是细胞病变抑制法。该法系先将IFN标本与病毒的靶细胞（如Wish细胞等）共同孵育一定时间，然后加入攻击病毒。再经一定时间培养，当未加IFN的对照内75%～100% 的细胞出现病变，而未加病毒的细胞对照依然完好时，通过显微镜观察细胞病变情况。此时，若与某一稀释度的IFN标本共育的细胞仍有50% 左右不出现病变，则表示该稀释度标本内含有保护细胞的足够的IFN，该稀释度即为标本中含有的IFN效价。 9．细胞受体的检测。受体是细胞表面标志之一，通过对受体的检测，可以了解细胞的功能，并为某些疾病的发病机制提供一定的理论依据。 （1）补体受体（CR）。CR存在于许多细胞表面，在调节补体级联反应中起关键作用，并参与同细胞表面补体成分的结合。最常见的有CR1、CR2、CR3、CR4，它们存在于不同的细胞上，分别识别不同的补体成分。如CR1可识别C3b和C4b，存在于人的红细胞、巨噬细胞的B细胞上。CR1具有一系列不同的生物学活性，包括清除循环免疫复合物、对补体系统的调节作用及识别补体覆盖的抗原等。CR2识别C3b，CR2和CR1在因子Ⅰ裂解灭活的C3b（iC3b）时有类似作用。CR3识别iC3b，主要存在于巨噬细胞上。CR4主要识别C3dg。 在不同的疾病状态，CR的表达出现异常。如在胰岛素依赖型糖尿病中CR1表达降低，而在系统性红斑狼疮中CR1则过度表达。 CR1可用免疫粘附法（IAHA）检测。先在U形底96孔板中加入不同稀释度的热凝聚IgG，再加入豚鼠补体后置37℃孵育30min；再加1%红细胞悬液。室温1h后出现凝集者为CR1阳性。CR1亦可用荧光激活细胞分离器进行检测。 （2）IL-2R和血清可溶性IL-2受体（SIL-2R）的检测。在免疫应答过程中，T细胞受抗原递呈细胞递呈的抗原和分泌的IL-1作用后，发生活化，在细胞膜表达IL-2R并分泌IL-2。因此，检测患者体内IL-2R+细胞数可提示T细胞的活化程度。近年来发现在某些疾病中，IL-2R表达异常，这种IL-2R表达的变化可用于检测疾病的预后及考察药物的疗效。测定IL-2R的一般采用免疫组化方法，可采用直接或间接免疫荧光染色来检测淋巴细胞表面的IL-2R，也可用标有荧光素的特异性抗体染色细胞后用流式细胞仪进行检测。检测SIL-2R常采用双抗体夹心的ELISA方法。先用一种单抗包被96孔酶标板，再加入待测标本和兔抗鼠的IgG-酶结合物。加入底物后，在ELISA阅读仪上测其OD值。 二、用免疫学方法研究中医的现状 自70年代以来，经学者们分析认为中医正气与免疫功能有密切联系，因此有人主张将之作为中西医结合的重要方向。临床在多方面研究了正虚与人体免疫功能的关系，观察到虚证病人的免疫功能普遍下降，并发现扶正固本法可以改善其低下的免疫功能，以后也发现祛邪法可以抑制亢进的免疫功能。陆续观察了多种免疫有关疾病，得到了类似的结果。进一步复制了虚证和实证动物模型，试验了多种中药复方及单味药的调节作用，目前已知多种中药对多种免疫有关疾病的治疗作用与其对免疫调节作用有关。在研究过程中，已自当初的临床病例的观察进入实验室多种指标的分析，并结合了动物试验，自复方的观察到单味药及有效化学成分提取的分析，从整体进入细胞、分子和基因水平，应用了各种先进技术和仪器设备，此方面工作对中医学和免疫学的发展起到极大的促进作用。 （一）临床研究 1．虚证及实证病人的免疫状态。 2．扶正与免疫。 3．祛邪与免疫。 （二）实验动物模型 （三）中药的免疫调节作用 1．扶正固本类中药。可能与下列因素有关：1）活化免疫细胞，2）激活巨噬细胞的吞噬功能，3）促进细胞因子的分泌和活性，4）促进