生化物质的提取.PPT

2．酶处理法 用外来酶处理生物材料，如溶菌酶（Lysozyme）是专一地破坏细菌细胞壁的酶。如用噬菌体感染大肠杆菌细胞制造DNA时，采用pH8的0.1mol／L三羟甲基氨基甲烷（Tris）－0.01mol／L乙二胺四乙酸（EDTA）制成每毫升含2亿个细胞的细胞悬液， 然后加入100μg～ 1mg的溶菌酶，在37℃保温10min，细菌胞壁即被破坏；还有把蜗牛酶用于酵母细胞的破碎；用胰酶处理猪脑制备脑安素。用于专一性分解细胞壁的酶还有纤维素酶（破坏植物细胞）、细菌蛋白酶、酯酶、壳糖酶等。 3.表面活性剂处理法 表面活性剂的分子中，兼有亲脂性和亲水性基团，能降低水的界面张力，具有乳化、分散、增溶作用。较常用的有十二烷基硫酸钠(SDS)、氯化十二烷基吡啶、去氧胆酸钠等。 生化物质的提取 利用一种溶剂对不同物质溶解度的差异，从混合物中分离出一种或几种组分的过程称为提取（extraction），提取又称萃取或抽提，其含义基本相同。用冷溶剂从固体物质提取的过程可称为浸渍（maceration）；用热溶剂者可称为浸提（digestion），也称浸煮 一、物质的性质与提取 （一）物质的性质与提取方法的选择 选择合适的溶剂系统与提取条件。 （二）活性物质的保护措施 1．采用缓冲系统 2．添加保护剂（半胱氨酸，还原性谷胱甘肽等） 3．抑制水解酶的作用(SDS,EDTA) 4．其他保护措施(避免过酸过碱和剧烈搅拌 ） （三）生化物质的提取 一般生产上多用2～3次提取。溶剂用量（L）为生物材料的2～5倍，少数情况也有用10～20倍量溶剂作一次性提取。目的是节省提取时间，降低有害酶的作用。 二、影响提取的因素 （－）温度 （二）酸碱度 （三）盐浓度 四、提取方法 （—）用酸、碱、盐水溶液提取 （二）用表面活性剂提取 （三）有机溶剂提取 对酸性物质的提取，常在碱性条件下进行；对碱性物质的提取，常在酸性条件下进行；对两性物质的提取，则使水溶液的pH值在该两性物质的等电点附近为佳。 细胞色素C 的制备与测定 细胞色素C的性质 细胞色素（Cytochrome）是包括多种能够传递电子或能够激活氧的含铁蛋白质的总称，广泛存在于自然界，在各种动物，植物组织和微生物中都能找到。在生物氧化过程中，细胞色素是重要的呼吸传递体。细胞色素C（Cytochrome C）又称细胞色素丙， 简称细丙。主要存在于线粒体中，需氧多的组织含细胞色素C最多，如心肌及酵母细胞的细胞色素C含量比一般组织细胞的高。所以制备中多采用心肌和酵母作为提取分离细胞色素C的原料。 * * 思考题（课前设疑） 1.如何保持生化物质的生物活性？一般生化物质在碱性条件下容易变性，还是在酸性条件下容易变性？ 3.在制备生化物质前应如何选择原料？ 2.一般从天然生物材料制作生化物质的过程大体可分为几个阶段？ 5.对酸性物质的提取，常在什么条件下进行？对碱性物质的提取，常在什么条件下进行？对两性物质的提取，常在什么条件下进行？ 6.以细丙为例解释提取制备每步的基本原理？ 4.什么叫动态吸附和静态吸附？它们在应用上有何区别？ 生 化 物 质 的 制 备 一般从天然生物材料制作生化物质的过程大体可分为六个阶段： 1.原料的选择和预处理 2.原料的粉碎； 3.提取，即从原料中经溶剂分离有效成分，制成粗品 的工艺过程； 4.纯化，即粗制品经盐析、有机溶剂沉淀、吸附、层析、透析、超离心、膜分离、结晶等步骤进行精制的工艺过程； 利用生化制备技术从生物材料中获得特殊的生物活性物质，如蛋白质、酶、激素、核酸等生化产品时，通常要注意以下几个问题： 6.成品及.制剂，即半成品或原料药经精细加工制成片剂、口服液、针剂、冻干剂等供饮用或临床应用的各种剂型。 5.干燥及保存； 1．生物材料的组成成分非常复杂，有数百种甚至更多，各种化合物的形状、大小、相对分子质量和理化性质都各不相同，有的迄今还是未知物，而且这些化合物在分离时仍在不断的代谢变化中。 2．在生物材料中，有些化合物含量很低或极微，有的只有1／l0 000，甚至更少。制备时，原材料用量很大，得到产品很少，与投料量相比“虎头蛇尾”。近年来，用所谓“钓鱼法”，利用某些分子特有的专一亲和力，将某一化合物从极复杂的体系中“钓”出来，与其他化学分离技术相比具有很大的优越性。 3．许多生物活性物质，