通过减少延迟体积轻松进行高通量分析的梯度优化应用 - Agilent.PDF

通过减少延迟体积轻松进行高通量分析的梯度 优化 应用 作者 引言 John W. Henderson, Jr., William Long, and Cliff Woodward RRHT 短柱非常适用于高效液相色谱（HPLC ）梯度 Agilent Technologies, Inc. 方法。 短柱（ 到 ）与常规的 1.8 µm 30 50 mm 5 µm 2850 Centerville Road 柱（ 100 mm 到250 mm ）相比，能在更高的流速下 Wilmington, DE 19808 USA 操作，因而再平衡更快。缩短再平衡时间是一种将梯 度方法变成高通量梯度方法的关键策略。RRHT 短柱 摘要 缩短了分析时间，也相应缩短了再平衡时间，原因很 简单，因为柱体积成比例减少。 开发高通量梯度分析方法的通常要包括缩短色谱柱再平衡时间 除此之外还有其它的优点，改变梯度方法往往比改变 和减少梯度延迟体积。使用 快速分离高通量 （ ） ZORBAX RRHT 等度方法更困难，因为改变后的色谱结果（例如，分 短柱，与分析型柱相比，明显缩短了再平衡时间，再加上一 离度）可能会和原来的梯度色谱图不一致。这种现象 种简单的G1312B 泵流路配置，减少系统延迟体积。用小体积 在标准内径（4.6 mm 内径）过渡到窄内径（2.1 mm 柱进行梯度分析需要低延迟体积。通过将标准延迟体积配置和 内径）梯度方法时尤为突出。难点是要减少从梯度起 低延迟体积配置得到的色谱图进行比较，证明了这一点。为使 始点到在柱头形成梯度之间的时间和体积。通常称为 用小体积色谱柱对泵进行优化后，得到了更窄的峰形，并提高 延迟时间或延迟体积。延迟的差异导致在梯度过程中 了通量。另外，实验结果还显示，用C8 固定相取代RRHT 任意时间点上色谱柱中流动相组成不同。从而造成保 C18 固定相，加快了分析速度。 留差异，感兴趣色谱峰的分离度也可能不同。 本应用报告介绍了一种简单的泵配置方法，可以减少 延迟体积，改善低体积RRHT 梯度方法的色谱结果。 实验 100 mm RRHT 柱的较短柱长直接使速度加快了2.5 倍。另外，由于有RRHT 粒径分布的专利设计，反压 高分离度快速液相色谱（ ）系统包括： 比其它亚 微米色谱柱更低。 Agilent RRLC 2 • G 1 3 6 5 C 多波长检测器（M W D ），检测波长 开发高通量梯度分析方法的一般途径是，缩短色谱柱 254 nm ，配置G1315-60024 微量流通池，响应时 再平衡时间和减少梯度延迟体积。 间设置 秒 0.5 RRHT 短柱自动缩短色谱柱再平衡时间 二元泵，流动相 ： 甲酸水溶液 • G1312B A