人羊膜上皮细胞培养工艺的优化及生物学特性.docVIP

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人羊膜上皮细胞培养工艺的优化及生物学特性

人羊膜上皮细胞培养工艺的优化及生物学特性 刘 超,徐志国,王绍红,程红玲,杨旭巍,贡 波,刘 洋,徐春艳(浙江省脐带血造血干细胞库,协和华东干细胞基因工程有限公司,浙江省湖州市 313000) 引用本文:刘超,徐志国,王绍红,程红玲,杨旭巍,贡波,刘洋,徐春艳. 人羊膜上皮细胞培养工艺的优化及生物学特性[J].中国组织工程研究,2017,21():2100-2107. DOI:10.3969/j.issn.2095-4344.2017.13.022 ORCID: 0000-0003-1307-1222(徐志国) 文章快速阅读: 文题释义: 人羊膜上皮细胞:是一类存在于胎盘羊膜上的成体干细胞,表达多种胚胎干细胞标志物,具有多向分化潜能,能向3个胚层的细胞分化,不表达端粒酶,无致瘤性,免疫原性低,安全性好,因此具有广阔的临床应用前景。 人羊膜上皮细胞的分离培养:目前国内外常用的人羊膜上皮细胞分离方法是胰酶分步消化法。Sean等使用谷类中表达的牛胰蛋白酶重组体,37 ℃水浴下两步胰酶消化方法,得到上皮细胞(12±4)×107。Pratama等在培养人羊膜上皮细胞时发现在相同时间内,DMEM/F12培养基比Epilife培养基相对于其他无血清培养基更能延长表皮角质细胞在体外的寿命在总的细胞扩增数量上更具有优势。 为4×108 L1,表皮生长因子质量浓度为10 μg/L,血清体积分数为5%;优化冻存条件为:细胞冻存浓度为1×1010 L1,二uman amniotic epithelial cells: culture technology optimization and biological characteristics Liu Chao, Xu Zhi-guo, Wang Shao-hong, Cheng Hong-ling, Yang Xu-wei, Gong Bo, Liu Yang, Xu Chun-yan (Umbilical Cord Blood Hematopoietic Stem Cell Bank of Zhejiang Province, Eastern Union Stem Cell Gene Engineering Co., Ltd., Huzhou 313000, Zhejiang Province, China) Abstract BACKGROUND: As current studies on isolation, culture and cryopreservation of human amniotic epithelial cells (hAECs) are relatively scattered, it is difficult to form a comprehensive and effective solution to meet the clinical needs of stem cells for transplantation in future. OBJECTIVE: To establish the technology of isolation, culture and cryopreservation of hAECs, and to study the biological characteristics of hAECs. METHODS: Orthogonal method was used to study the effects of different factors on the separation, culture and cryopreservation, and range method was adopted to analyze the data to optimize the separation, culture and cryopreservation. We performed cell primary and passage cultures, morphology observed by microscope, drawn cell growth curve and flow cytometry assay, immunofluorescence staining, hepatocyte like cell differentiation to study the biological characteristics of hAECs. RESULTS AND CONCLUSION: (1) The optimal hAECs separation conditions were as foll

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