胚胎工程续(打印).pdfVIP

（二）、应用研究 动物体外受精技术 1. 治疗人类不孕症；2. 为胚胎移植产业开辟大量 胚胎来源；3. 家畜品种改良；4. 保种；5. 其他 第一节 体外受精技术概述 用途 一、体外受精技术的概念 第二节 卵母细胞的体外成熟 从狭义上讲，体外受精是指将动物受精过程中的 精卵结合在体外环境下完成的一种现象，包括自 一、卵母细胞的采集方法 然条件下的体外受精和人为培养条件下的体外受 1. 离体卵巢卵母细胞的采集 精。 （1）卵巢表面卵泡卵母细胞的获得 通常所指的体外受精技术，即为将哺乳动物的精 卵泡抽吸法；卵泡剥离法；切剖法 子和卵子置于体外适宜的培养条件下使之完成受 （2）卵巢内卵母细胞的获取 精的一种技术。 合格卵母细胞标准：放射冠细胞扩散良好， 从广义上讲，体外受精又包含卵母细胞的体外成 质地均一，放射冠细胞间透明；透明带清晰；卵 熟培养和受精卵的体外培养两项密切相关的技术。 母细胞圆形，直径大小适中，细胞质质地均匀， 二、体外受精技术的发展概况 色泽柔和，透明度适中（图－1）。 哺乳动物体外受精的研究已有 120 多年的历史。 2、体外成熟的卵母细胞 1878 年，德国科学家 Schenk 首先开始哺乳动物体 1）卵母细胞来源 外受精的尝试。 （1）卵巢来源：从屠宰场宰杀的母畜获得卵 1944 年，Pock 和 Menkin 进行了人卵的体外受精 巢，38°C 生理盐水中保温，宰杀后 2 小时内运回 研究。 实验室。 精子获能现象的发现，是哺乳动物体外受精发展 （2）采集卵母细胞－卵丘细胞复合物：用 史上的里程碑。 38°C生理盐水洗涤卵巢 2 次，左手持卵巢，右 1959 年，美籍华人张明觉获得了世界上第一批体 手持注射器，如图所示，抽取 3－5mm 卵泡的卵 外受精的试管小兔。此时，体外受精技术才真正 泡液及卵母细胞－卵丘细胞复合物，置于 20ml 试 得到承认并为人们所接受。 管内，静置待检。选择 3－5 mm 卵泡的原因是： 先后在近 20 余种动物进行了体外受精的研究，有 更大卵泡的闭锁比例可能较高，更小卵泡的发育 10 余种动物获得了体外受精的试管动物。 程度可能低。 目前，一套高效的牛胚胎体外生产程序已建立起 生理盐水配方：NaCl 18g，Mill-Q （或三 来。 蒸水）2l，青霉素 2,000,000IU，链霉素 2g。 我国体外受精技术的研究起步于 80 年代后 镜检卵母细胞－卵丘复合物：用吸管吸取经静置 期，但进展很快，已先后在人和牛等 8 种动物取 后试管底部的混合物于平皿中，用吸管铺平，在 得成功。特别是人和牛的体外受精技术已达到国 实体显微镜下用吸管检出卵母细胞－卵丘复合物， 际先进水平，每年约有近千例试管婴儿诞生，数 置于另一平皿中，用洗涤液在实体显微镜下洗涤 2 百头试管牛出生。