医学免疫学5.细菌的遗传与变异2011中医.pptVIP

首先，用超声波将细菌染色体DNA随机切割成一定大小的DNA片段，插入到测序载体（质粒）中，以构建DNA文库，进行大规模的测序，对DNA序列加以拼接。 1、核苷酸序列测定 四、微生物基因组学 经过计算机分析，完成全基因组各个区域的编号和注释，最后存入数据库，并在互联网上发表，以供全世界的科学家参考和使用。 四、微生物基因组学 细菌全基因组序列测定完成后，更重要的任务是鉴定基因及尽可能确定基因的功能，称之为后基因组学。 2、微生物基因组结构与功能研究 四、微生物基因组学 通常采用开放读码框（ORF）推定、密码子使用和同源性比较等技术鉴定基因。应用生物信息学分析软件，将基因组中的功能性序列序区鉴定出来。 四、微生物基因组学 3、微生物基因组学研究的意义 四、微生物基因组学 根据病原菌全基因组序列，应用现代生物信息软件对基因序列进行分析，可确定哪些基因与毒力、体内定居或体内持续感染有关，从而阐明病原菌致病基因及其产物。 （1）揭示病原微生物的致病机制 四、微生物基因组学 从分子和细胞水平上，揭示微生物与宿主之间的相互作用，更深入地阐明病原微生物的致病机制，诸如毒素作用机制、宿主细胞中微生物的受体，侵入细胞内微生物的定位和新表位的发现，对宿主免疫系统的反应等。 四、微生物基因组学 （2）建立灵敏特异的基因诊断技术 传统的病原体诊断依赖于致病微生物的形态、培养和生化特征。 通过测定多种致病与非致病微生物的基因组序列，可以获得大量的基因信息。如特异DNA序列用于诊断，菌株特异性基因用于分型。 四、微生物基因组学 （3）开发新型抗菌药物 病原菌全基因组序列的测定，一方面，能揭示细菌耐药的确切机制，对现有抗菌药物进行改造或开发新型药物。 四、微生物基因组学 另一方面，可使药物的研发策略从筛选化合物库转向优先筛选靶位基因，即以病原菌为目标，找出在人类基因组中缺失，对耐药菌生存必不可少并在感染过程中优先表达的基因；选择这些基因作为抗菌药物的靶位点，可设计出具有针对性很强的药物（窄谱抗生素）。 四、微生物基因组学 ↓分子遗传学 靶位确定 ↓生物信息学 潜在的靶位 ↓DNA测序 基因组序列 目标病原菌 ↓生物化学、结构生物学 靶位结构和功能 ↓生物化学 抑制/结合分析 四、微生物基因组学 ↓动物模型分析 体内活性 ↓全细胞分析、组合化学 全细胞特异性靶位活性 ↓组合化学、结构设计 改进后的先导化合物 ↓临床试验 批准上市 ↓化合物库、高通量筛选 最初的活性化合物 四、微生物基因组学 病原菌全基因组序列的测定，还可大大加速新疫苗的研制。 （4）开发新型疫苗 四、微生物基因组学 通过生物信息学软件，对全基因组序列进行分析，可预测出病原体的具有很高免疫原性的保护性抗原及其表位。 将抗原或表位编码基因在合适的载体系统中表达，分离纯化目的抗原或表位。最后，检测抗原的安全性和有效性。 四、微生物基因组学 随着微生物基因组被解码和微生物功能基因组的研究与开发，微生物学正面临着革命性的飞跃。微生物基因组研究所获得的信息将迅速转化为生产力，微生物感染性疾病的诊、防、治，将会彻底得到改观。 四、微生物基因组学 一、细菌遗传的物质基础二、细菌的基因突变三、细菌的基因转移与重组四、微生物基因组学五、基因工程菌株的构建 细菌的遗传与变异 目的基因 ＋ 重组质粒 转化 → 目的蛋