雷公藤甲素、雷公藤红素对外周血单个核细胞干扰素刺激基因表达影响.pdf

lIlllllllllJllll Illltlllllllllllbbblllllllil 目录 中文摘要………………………………………………………………………………………2 Abstract……………………………．……………………………………．…………………．……………………………．．4 前言……………………………………………………………………………………………6 研究对象与方法………………………………………………………………………………8 一、研究对象………………………………………………………………………………8 二、实验材料与仪器……………………………………………………………………．10 三、标本的收集与处理…………………………………………………………………．11 四、PBMC刺激与培养…………………………………………………………………．11 五、提取PBMC总RNA…………………………………………………………………12 六、将总RNA逆转录为cDNA…………………………………………………………13 七、实时荧光定量PCR…………………………………………………………………．13 八、统计分析……………………………………………………………………………．14 结果………………………………………………………………………………………………………………………一15 一、入组患者临床特征…………………………………………………………………．15 二、各分组间未受LPS刺激外周血单个核细胞ISG表达水平存在差异……………15 三、足量LPS刺激对外周血单个核细胞表达ISG影响………………………………16 四、雷公藤甲素对受LPS刺激的外周血单个核细胞ISG表达水平的影响…………17 五、雷公藤红素对LPS刺激外周血单个核细胞ISG表达水平的影响………………23 讨论………………………………………………………………………………………………………………………．．30 结论………………………………………………………………………………………………………………………一33 参考文献……………………………………………………………………………………．34 致谢………………………………………………………………………………………………………………………一39 中文摘要 研究目的： bloodmononuclear 通过检测人外周血单个核细胞(peripheral cell，PBMC)接 受LPS刺激前后干扰素刺激基因(IFN．stimulated gene，ISG)表达水平的改变， 探究雷公藤甲素、雷公藤红素两种药物对HIV／AIDS患者免疫激活状态的抑制作用。 研究方法： 从北京协和医院艾滋病诊疗中心的就诊患者中选出长期接受cART治疗的 对照8例，收集临床资料并留取外周血标本，分离PBMC，加入足量LPS刺激后 在不同药物浓度下进行细胞培养，提取细胞总mRNA，进行逆转录，运用实时荧 水平。观察药物及LPS刺激前后目的基因表达水平的变化，比较各组之间的差异。 方差分析、配对t检验等，定义P0．05具有统计学显著性。 研究结果： 1、入组患者临床特征： 共入组患者及健康人34例，其中抗病毒治疗组13例，cART治疗时间中位数 各项感染指标均为正常。 2、各分组未受LPS刺激外周血单个核细胞ISG表达水平存在差异： 在未接受LPS刺激的健康人对照组、抗病毒治疗组及未抗病毒治疗组PBMC 存在一定差异(PO．05)； 3、足量LPS刺激影响外周血单个核细胞ISG表达水平： 在体外加入足量LPS(1ug／m1)刺激后，健康人对照组、治疗患者组、未治疗 平则无显著变化。 2 4、雷公藤甲素、雷公藤红素显著影响LPS刺激后外周血单个核细胞ISG基因 表达水平：