AVBD6对细菌感染和应激响应及对CLEAP-2表达影响.pdfVIP

Anhui Agricultural University Response of AvBD6 on bacterial infection and stress and Exogenous AvBD6 on cLEAP-2 Candidate: Liang Rui Instructor: Peng Kai-song Academic Degree: Master of Agriculture Major: Basic Veterinary Science Direction: Animal Pathology and Biological Control Institute: College of Animal Science ＆Technology May 2014 万方数据 万方数据 国家自然科学基金项目： “抗ACTH 肽对鸡应激性免疫抑制的拮抗及其机制” 万方数据 摘要 β 防御素是一类具有广谱抗菌活性的内源性小分子阳离子抗菌肽。禽类吞噬细 胞缺乏氧依赖性杀菌机制，其对细菌的清除更依赖于阳离子抗菌肽。AvBD6 是 β 防御素家族成员之一，是有前景的新型抗生素替代品。 目前，关于禽β 防御素的定量研究报道较少，而定量研究是深入理解禽β 防御 素病理生理学意义及临床应用的基础。因此，本研究拟通过建立检测 AvBD6 的夹 心ELISA 法，检测不同病理生理状态下血清或组织中AvBD6 的浓度；同时，还探 讨外源性AvBD6 对鸡肝脏分泌抗菌肽（LEAP-2 ）表达量的影响。主要研究结果如 下： 1、建立检测AvBD6 的夹心ELISA 法 鼠源包被抗体的免疫原是KLH 偶联的AvBD6 的B 细胞线性表位 （PGPCRW-KLH ）。兔源检测抗体的免疫原是KLH 偶联的AvBD6 的N 端 （SPIHACRYQRGV-KLH ）。包被抗体、检测抗体和辣根过氧化酶标记的羊抗兔IgG 的最佳工作稀释倍数，分别为2500 、2000 和10000。在20~320 ng/mL 的线性范围 内，标准曲线的回归方程为：y=12024x-2583 ，（其中y 为AvBD6 合成肽浓度，x 为 2 OD450 ，R =0.9842 ）。 2 、不同病理生理条件下AvBD6 浓度测定 随沙门氏菌感染时间推移，鸡十二指肠中AvBD6 的浓度（由34.88 ng/mL 至 122.64 ng/mL ）、空肠中AvBD6 的浓度（由45.015 ng/mL 至183.39 ng/mL ）和血清 中AvBD6 的浓度（由7320.38 ng/mL 至7855.56 ng/mL ）均呈现上升趋势，且与同 时间点的对照组差异显著（P0.05 ）。大肠杆菌感染组血清中的AvBD6 浓度（7641.49 ng/mL ）比同时间点对照组高，且差异显著 （P0.05 ）。随着冷应激时间延长，血清 中AvBD6 的浓度（由502.095 ng/mL 至1525.75 ng/mL ）呈上升趋势，且在刺激12h 之后其浓度（3666.12 ng/mL ）显著上调。在注射ACTH （25 IU/kgBW ）1d 后，AvBD6 浓度 （1245.60 ng/mL ）比同时间点的对照组略低，而连续注射5d 后，AvBD6 浓度 （4429.96 ng/mL ）升高，但是均与同时间点的对照组差异不显著（P0.05 ）。 3、外源AvBD6 对鸡肝脏表达抗菌肽的影