激素和SB203580对LPS刺激小鼠肺泡巨噬细胞分泌TNF-α、1L-10影响及分子机制.pdf

目 录 中文摘要………………………………………………………………………l 英文摘要………………………………………………………………………5 IL．10的影响及分子机制 ． 前言……………………………………………………………………10月【J舌………………………………………………………．．…………．1U 材料与方法……………………………………………………………lO 结果……………………………………………………………………19 附图……………………………………………………………………2l 附表……………………………………………………………………30 讨论……………………………………………………………………31 结论……………………………………………………一…………．．．．36 参考文献………………………………………………………………37 综述p38MAPK抑制剂在呼吸系统疾病中作用的研究进展…………40 致谢…………………………………………………………………………51 个人简历………………………………………………………………52 中文摘要 IL．10的影响及分子机制 摘 要 物用于炎症性肺病(infl锄mato巧1ung 炎症、免疫等各种因素导致肺及支气管内大量巨噬细胞、中性粒细胞等炎 症细胞浸润，释放大量炎症介质产生瀑布级联，进而引起肺内炎性介质和 通过刺激机体各种免疫细胞产生大量的细胞炎性介质，进而诱发ILD。肺 泡巨噬细胞(alveolar 内源性炎症因子产生瀑布级联是导致炎症发生、发展的根本原因。信号转 transducersandactivators 导转录激活子．3(Signal 的激活在调控ILD起着关键的作用。抑制丝裂原活化蛋白激酶 (mitogen_activatedprotein 因子的释放。本实验以小鼠AM为研究对象，观察激素与p38MAPK特异 分析两者是否存在协同作用并进一步探讨STAT信号途径在其中的作用， 为临床应用激素及p38MAPK抑制剂治疗ILD提供理论基础。 方法： 胞株，调节细胞浓度到1x106／ml，于24孔板中培养过夜，随机分组：① 对照组：加入与各实验组体积相同的无血清RPMll640培养液； ②LPS+Dex组：终浓度为1×1 终浓度为1Oumol／L的SB203580预孵育20min后LPS刺激2h、6h、12h； umol／L的SB203580预孵育20min后 ⑤LPS+SB203580组：终浓度为10 6h、12h。 表达变化。 4．Wbstem 验分组同免疫细胞化学法，于6孔板中上述各组细胞刺激成功后收集细 胞，检测细胞内p．STAT3、S玑虹3表达。 数据以均数士标准差(i±置)表示，各组比较用单因素方差分析(0ne way 行两两比较分析是否有显著性差异，PO．05表示有统计学意义。 结果：． 1．细胞上清液中n师．0【含量的变化：LPS刺激MH—S细胞后，细胞上 增加，与LPS组在2h、6h、l 2h分别比较差异有统计学意义(PO．05)； 6h、1 2h分别比较差异也有统计学意义(PO．05)。 2 中文摘要 清液中IL．10含量在2h已经开始升高，6h达高峰，12h已经开始下降， 共同预处理后发挥协同作甩，进一步抑制LPS诱导的IL．10增加，与 3．免疫细胞化学结果表明：对照组细胞仅见微弱黄染；LPS刺激30min 后细胞黄染最强；用DEX预处理后，LPS刺激引起的细胞黄染减弱；用 预处理后发挥协同作用，LPS刺激引起的细胞黄染进一步减弱：用DEX 预处理后，未给予LPS刺激细胞微弱黄染。各组与对照组比较p．STAT3 预处理后，未给予LPS刺激细胞内p．STAT3表达微弱。各组与对照组比 少(PO．05)。 STAT3表达，统计学无显著差异