注意优化孵育时间和温度可以获得较佳的结果,通常,高亲.PDFVIP

产品简介： 操作步骤： 1． 将膜充分浸入适当体积的蛋白印记膜再生液中，室温孵育 15~30min 并摇动。 蛋白印迹膜再生液，用于 Western blot 中转移了蛋白的膜的重复利用。在 注意：优化孵育时间和温度可以获得较佳的结果，通常，高亲和力的抗体将 Western blot 中完成了一抗二抗结合和后续的化学发光检测后，有时还需要检测 会需要更长的洗膜时间如 30 分钟以上，在 37 ℃孵育会获得较好效果。 其它蛋白进行比较。蛋白印迹膜再生液中的特殊成份可解离膜上抗原与抗体的结 合，但不影响转移到膜上的蛋白，随后，可以使用不同的抗体进行下一轮 Western 2. 用镊子取出膜，用洗涤缓冲液 PBS 或 TBS 冲洗膜一次，然后摇动洗涤 5~10 blot 实验检测其它蛋白。当需要进行多次蛋白检测时，采用本方法与重新电泳、转 分钟。 膜相比，不仅节省样品、材料和时间还可以消除重新上样带来的误差，增强试验 3. 检测抗体是否去除的方法如下： 的可比性。 1）检测是否完全去除HRP 标记二抗：将洗后的膜进行 X 光胶片曝光并显影， 如果胶片上没有显示条带, 说明二抗已经成功地从抗原或者一抗上去除； 产品特点： 2 ）检测是否完全去除一抗：将膜孵育在 HRP-标记的二抗中，用洗涤缓冲液 洗涤，X 光胶片曝光并显影，胶片上没有显示条带，说明一抗已经去除。 1．传统分子克隆上介绍的方法对抗原洗脱强度过大，常常会导致蛋白信号的减 4. 如果步骤 3 检测到信号则需重复步骤 1，再次洗涤 5~15min 。 弱，但是本蛋白印记膜再生液效力强，但是对蛋白作用温和。 注意：许多抗原抗体系统需要增加温度或者延长时间才能完全去除。优化洗 2．本品不含有 β-巯基乙醇，无毒无味，操作简单快速，室温保存和使用。 膜时间和温度来确保完全去除抗体而不破坏抗原。 5. 在确定膜上抗体已经完全洗掉后，重新封闭，即可以进行下一轮 Western Blot 适用范围： 实验。 已转移了蛋白的硝酸纤维素膜或PVDF 膜 说明： 1．膜可以进行多次Western blot ，但也许会需要更长的曝光时间或者更灵敏的化学 自备材料：