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注意优化孵育时间和温度可以获得较佳的结果,通常,高亲
产品简介: 操作步骤:
1. 将膜充分浸入适当体积的蛋白印记膜再生液中,室温孵育 15~30min 并摇动。
蛋白印迹膜再生液,用于 Western blot 中转移了蛋白的膜的重复利用。在
注意:优化孵育时间和温度可以获得较佳的结果,通常,高亲和力的抗体将
Western blot 中完成了一抗二抗结合和后续的化学发光检测后,有时还需要检测
会需要更长的洗膜时间如 30 分钟以上,在 37 ℃孵育会获得较好效果。
其它蛋白进行比较。蛋白印迹膜再生液中的特殊成份可解离膜上抗原与抗体的结
合,但不影响转移到膜上的蛋白,随后,可以使用不同的抗体进行下一轮 Western 2. 用镊子取出膜,用洗涤缓冲液 PBS 或 TBS 冲洗膜一次,然后摇动洗涤 5~10
blot 实验检测其它蛋白。当需要进行多次蛋白检测时,采用本方法与重新电泳、转 分钟。
膜相比,不仅节省样品、材料和时间还可以消除重新上样带来的误差,增强试验 3. 检测抗体是否去除的方法如下:
的可比性。 1)检测是否完全去除HRP 标记二抗:将洗后的膜进行 X 光胶片曝光并显影,
如果胶片上没有显示条带, 说明二抗已经成功地从抗原或者一抗上去除;
产品特点: 2 )检测是否完全去除一抗:将膜孵育在 HRP-标记的二抗中,用洗涤缓冲液
洗涤,X 光胶片曝光并显影,胶片上没有显示条带,说明一抗已经去除。
1.传统分子克隆上介绍的方法对抗原洗脱强度过大,常常会导致蛋白信号的减
4. 如果步骤 3 检测到信号则需重复步骤 1,再次洗涤 5~15min 。
弱,但是本蛋白印记膜再生液效力强,但是对蛋白作用温和。
注意:许多抗原抗体系统需要增加温度或者延长时间才能完全去除。优化洗
2.本品不含有 β-巯基乙醇,无毒无味,操作简单快速,室温保存和使用。
膜时间和温度来确保完全去除抗体而不破坏抗原。
5. 在确定膜上抗体已经完全洗掉后,重新封闭,即可以进行下一轮 Western Blot
适用范围: 实验。
已转移了蛋白的硝酸纤维素膜或PVDF 膜
说明:
1.膜可以进行多次Western blot ,但也许会需要更长的曝光时间或者更灵敏的化学
自备材料:
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