微生物学实验设计书.docxVIP

微生物学设计性实验环境中放线菌的提取分离，鉴定以及生物活性的研究摘要：放线菌是重要的抗生素产生菌，具有抑菌性，本实验以土壤中的放线菌为实验对象，经过对土壤中的放线菌的分离纯化从而获得纯种的放线菌，进而对它的抑菌性进行研究，得出的结论为土壤中的放线菌具有抑菌性。关键词：放线菌 分离纯化 抑菌性 前言因其菌落呈放射状而得名。大多有基内菌丝和气生菌丝，少数无气生菌丝，多数产生分生孢子，有些形成孢囊和孢囊孢子。依靠孢子繁殖。表面上和属于真核生物的真菌类似，从前被分类为“放线菌目”(Actinomycetes)。但因为放线菌没有核膜，且细胞壁由肽聚糖组成，和其它细菌一样。目前通过分子生物学方法，放线菌的地位被肯定为广义细菌的一个大分支。放线菌用革兰氏染色可染成紫色（阳性），和另一类革兰氏阳性菌——厚壁菌门相比，放线菌的GC含量较高。2.1实验目的学习和掌握土壤中放线菌的分离和纯化技术观察放线菌菌体的基本形态鉴定以及探究其生物活性3. 实验原理放线菌是原核生物，是重要的抗生素产生菌，在土壤中的数量仅次于细菌，尤其在有机质丰富、透气性好的中性到微碱性土壤中的数量较多，土壤颗粒的分散程度对于分离放线菌也有影响。分离放线菌时，一般在制备的土壤稀释液时添加百分之十的酚或在分离培养基中加相应的抗生素以抑制细菌和霉菌。（如加链霉素25-50μ/ml以抑制细菌;添加制霉菌素50μ/ml或多菌灵30μ/ ml以抑制霉菌）。胆酸钠处理土壤悬液后土壤分散效果较好，且优于纯蒸馏水。这可能是因为胆酸钠对土壤腐殖质具有较强的结合能力从而有利于破坏土壤团聚结构。重铬酸钾对土壤真菌、细菌的抑制作用较明显，然而对放线菌并无抑制作用。而且其价格低廉。其可作为理想的放线菌分离抑制剂。实验证明酵母膏、SDS（十二烷基硫酸钠）也有抑菌的作用。 要想获得放线菌的纯培养，还需提供有利于该微生物生长繁殖的最适培养基及培养条件。4 材料与方法4.1 菌源：选定采土地点后，铲去表土层2—3cm，取3—10cm深层土壤10g，装入已灭过菌的纸袋中，封好袋口，并记录取样地点、环境及日期。土壤采集后应及时分离，凡不能及时分离的样品，应保存在低温、干燥条件下，尽量减少其中菌相的变化。4 .2 试剂与仪器 培养基：1、 高氏一号培养基 ： K2HPO4﹒3H2O 0.5g，可溶性淀粉 20g，KNO3 1g, MgSO4﹒7H2O 0.5g， FeSO4﹒7H2O