HPLC法测定蒙药查干-扫日劳-4汤中金丝桃苷含量.doc

HPLC法测定蒙药查干-扫日劳-4汤中金丝桃苷含量（1.内蒙古民族大学附属医院，内蒙古 通辽 028042；? 2.内蒙古民族大学 化学化工学院，内蒙古 通辽 028042;? 3.内蒙古民族大学 蒙医药研究中心，内蒙古 通辽 028042）?? 摘 要：目的：测定蒙药查干-扫日劳-4汤中金丝桃苷的含量。方法：采用高效液相色谱（HPLC）法测定。色谱柱：symmetry C18（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：甲醇-水-醋酸（48∶52∶1）；检测波长：363nm；流速：0.5mL#8226;min-1。结果：金丝桃苷在0.125～1.25μg范围内具有良好的线性关系，平均加样回收率为98.18%，RSD=1.62%。结论：该方法具有较高的准确度和精密度，重复性良好，可作为蒙药查干-扫日劳-4汤中金丝桃苷的含量测定方法。? 关键词：HPLC法；查干-扫日劳-4汤；金丝桃苷? 中图分类号：R927.2文献标识码：A文章编号：1673-2197（2009）03-0025-02? 查干-扫日劳-4汤是蒙医临床上常用的蒙药之一，被《内蒙古蒙成药标准》收载[1]。在临床上常用于清热、止咳、祛痰。用于肺热、咳嗽、多痰、胸背刺痛等症。由北沙参、甘草、紫草茸、连翘、拳参组成[1]。该药的薄层鉴别法研究已有报道[2]。但其含量测定方法尚未建立。金丝桃苷为处方中连翘的主要药效成分之一。课题组对处方中金丝桃苷含量测定方法进行研究，建立了高效液相色谱测定方法[3-6]。此方法简便，可靠，可用于该蒙药中金丝桃苷的含量测定报道如下。? 1 仪器与试药? LC-10AT高效液相色谱仪（日本岛津公司），N3000色谱工作站，电子天平（上海FA2004），SYZ-B型石英亚沸高纯水蒸馏器（南京安铎贸易有限公司），KQ-100型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），数字式恒温水箱（中外合资深圳天南海北有限公司）；甲醇（色谱纯，天津市永大化学试剂厂），蒸馏水（自制），乙醇、冰醋酸（分析纯，天津市永大化学试剂厂），金丝桃苷对照品（中国药品生物制品检定所），查干-扫日劳-4汤（内蒙古库伦蒙药厂，批号20080420。? 2 溶液的制备? 2.1 对照品溶液的制备? 精密称取金丝桃苷标准样品6.25mg，置于25mL容量瓶中，加50%乙醇溶解并稀释至刻度，超声处理，摇匀，得浓度为0.25mg#8226;mL-1的含金丝桃苷对照品溶液。? 2.2 供试品溶液的制备? 精密称取蒙药查干-扫日劳-4汤0.2g，置于具塞小三角烧瓶中，加50%乙醇20mL，超声处理35min，冷却，过滤，在25mL容量瓶中定容。进样时经0.45μm微孔滤膜滤过处理。? 3 色谱条件? 色谱柱：Symmetry C18（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：甲醇-水-醋酸（48∶52∶1）；流速为0.5mL#8226;min-1；柱温25℃；检测波长：363nm；进样量：10μL。? 4 系统适用性试验? 理论塔板数按金丝桃苷计算不低于6400，金丝桃苷与相邻色谱峰之间的分离度大于1.53，拖尾因子1.01。在以上色谱条件下，金丝桃苷对照品和查干-扫日劳-4汤供试品溶液的色谱图见图1和图2。? 5 线性关系考察? 取对照品溶液（0.25mg#8226;mL-1）1mL，用甲醇稀释一倍，在上述色谱条件下，精密量取已稀释的对照品溶液（0.125mg#8226;mL-1）1，2，4，6，8，10μL进样，记录色谱图。以峰面积（A）为纵坐标，进样量（W）为横坐标，进行线性回归。得回归方程：A=1.62×106-3.66×104W，r=0.9998，表明金丝桃苷在0.125～1.25μg范围内与峰面积积分值呈良好线性关系。回归曲线见图3：? 6 重复性与稳定性试验? 取批号为的样品按前述(2.2项)供试品溶液的制备方法制备6份供试品溶液，分别测定，结果RSD=1.37%，重复性较好;取同一份查干-扫日劳-4汤供试品溶液，按上述色谱条件，分别在1h、2h、4h、8h、12h进样测定，RSD=1.98%，表明供试品溶液中金丝桃苷至少在12h内稳定。? 7 精密度试验? 精密吸取金丝桃苷对照品溶液（0.125mg#8226;mL-1）10μL，重复进样5次，结果金丝桃苷峰面积RSD为1.53%，表明该方法精密度良好。? 8 加样回收率试验? 精密量取已知含量的查干-扫日劳-4汤样品（批号含量为3.102mg#8226;g-1）0.2g共6份，分别加入金丝桃苷对