HPLC法测定风痛定胶囊中青藤碱含量.doc

HPLC法测定风痛定胶囊中青藤碱含量【摘 要】 目的 建立风痛定胶囊中青藤碱含量HPLC测定方法。方法 色谱柱为CenturySIL 5 μm C18-BDS分析(4.6 mm×250 mm,5 μm)柱,流动相为甲醇:[(乙二胺:水)(1:300)](62:38),流速为0.5 mL/min,检测波长为262 nm。结果青藤碱在1.06～10.6 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系,r =0.999 8,平均回收率为93.38%,RSD为1.94%(n=5)。结论此方法准确可靠,简单易行,可用于该制剂的质量控制。 【关键词】风痛定胶囊;青藤碱;高效液相色谱法 风痛定胶囊由青风藤、黄柏、苍术、黄芪等七味中药组成[1],本文采用高效液相色谱法测定方中主药青风藤中青 藤碱的含量,方法准确可靠,重复性好。 1仪器与试药 美国DIONEX P680高效液相色谱仪;PDA 100 photodiode Array detector(二极管阵列检测器),7725i进样阀、chromeleon数据处理软件;色谱柱:Century SILC18-BDS分析柱(4.6 mm×250 mm,5 μm);R200D电子分析天平;SK250LH型超声波清洗器。 青藤碱对照品(中国药品生物制品检定所,批号0774-200206)风痛定胶囊3批(院内自制)。甲醇为色谱醇,水为超纯水;其余试剂均为分析纯。 2方法与结果 2.1色谱条件色谱柱:Century SIL 5 μm C18-BDS分析柱(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相:甲醇:[(乙二胺:水)(1:300)](62:38);检测波长:262 nm;流速:0.5 mL/min;柱温:26℃;进样量:20 μL[2]。 2.2对照品溶液的制备精密称取青藤碱对照品适量,用甲醇溶解并定容于10 mL容量瓶中,制得0.53 mg/mL青藤碱对照品溶液。 2.3供试品溶液的制备取风痛定胶囊10粒,倾出内容物,精密称定,置于25 mL容量瓶内,加甲醇至刻度,超声提取30 min,静置,精密量取上清液4 mL移至5 mL容量瓶内,用甲醇定容。摇匀,用微孔滤膜(0.45 μm)滤过,去续滤液,即得。 2.4线性关系考察精密移取制得的对照品溶液0.5,1,2,3,5 mL置5 mL容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,依次得到浓度为0.053 0 mg/mL,0.106 0 mg/mL,0.212 mg/mL,0.530 mg/mL的对照品溶液。以青藤碱进样量为横坐标,峰面积为纵坐标进行线性回归,回归方程为 Y=530.371 8X-2.307 2,r =0.999 8(n=5),表明青藤碱在1.06～10.6 μg范围内具有良好的线性关系。 2.5精密度试验取对照品溶液,按上述色谱条件重复进样5次,20 μL/次,测定青藤碱峰面积,RSD为0.9%(n=5)。 2.6干扰试验取不含青风藤阴性样品,按“2.3”项下方法制备阴性样品溶液,取对照品溶液、供试品溶液及阴性样品溶液各20 μL,注入色谱仪,记录色谱图,阴性样品对测定无干扰(图1～3)。 2.7稳定性试验取供试品溶液,分别在0,3,6,9,12 h进样20 μL,测定青藤碱峰面积,其RSD为0.8%(n=5),供试品溶液在12 h内稳定。 2.8重复性试验取同一批号样品5份,按“2.3”项下方法制备供试液,进样20 μL测定,青藤碱含量为0.364 mg/粒,RSD=0.7%(n=5)。结果表明重复性良好。 2.9加样回收试验采用加样回收法测定,在已知含量的样品中分别加入一定体积、已知浓度的青藤碱对照品,按供试品溶液制备方法操作,按色谱条件测定,计算回收率,结果(表1)。 2.10样品含量测定取样品照“2.3”项下方法制备供试液,进样20 μL,测定峰面积计算含量,结果(表2)。 3讨论 青风藤为风痛定胶囊中主药之一,主要含生物碱,包括青藤碱、双青藤碱、四氢表小檗碱、尖防己碱和土藤碱等[3],其中青藤碱含量较高,可作为含量测定指标。 测定波长的选择:取青藤碱对照品溶液,以甲醇为空白在200～300 nm范围内扫描,显示在262 nm处有最大吸收,故选择262 nm作为测定波长。 参考文献 [1]国家药典委员会,编.中国药典(二部)[S].北京:化学工业出版社,2005:附录66. [2]陈发奎.常用中药有效成分含量测定[M].北京:人民卫生出版社,1997:85-86. [3]王岩.青风藤的研究进展[J].中药材,2002,25(3):209-211. (收稿日期:2009-07-11)