RP-HPLC法测定银连合剂中绿原酸含量.doc

RP-HPLC法测定银连合剂中绿原酸含量[摘要]目的：建立银连合剂中绿原酸的含量测定方法。方法：采用RP-HPLC法，以YWG-C18为色谱柱，乙腈-0.4%磷酸(14:86)为流动相，检测波长为236 nm。结果：本法线性关系良好，绿原酸的平均回收率为99.7%，RSD为1.2%。结论：本方法简便、快速、重现性好，适用于银连合剂的质量控制和评价。 [关键词]绿原酸；RP-HPLC法；银连合剂 [中图分类号]R917[文献标识码]A[文章编号]1673-7210（2007）02（b）-125-01 银连合剂是由金银花、黄芩等6味中药组合而成，具有清热解表、止咳化痰的功效。用于感冒发热、伤风咳嗽、咽喉肿痛、四肢怠倦等。其所含的绿原酸为主要药效成分，本文以绿原酸为指标成分，建立了银连合剂中绿原酸的反相高效液相色谱测定方法，为该制剂的质量控制提供了客观的定量评价方法。 1 仪器与试药 1.1 仪器 LC-10A高效液相色谱仪（日本岛津），WYG-C18色谱柱（大连中汇达科学仪器有限公司），TU-1221紫外分光光度计（北京普析通用）；Force-7高速台式离心机（美国丹法）。 1.2 试药 绿原酸对照品由中国药品生物制品检定所提供（110753，供含量测定用）；乙腈为色谱纯，水为重蒸馏水，其他试剂均为分析纯，银连合剂（规格100 ml，批号分别为040512、040518、040520）由辽宁省人民医院自制。 2 方法与结果 2.1 色谱条件 色谱柱：YWG-C18(4.6 mm×150 mm，5 μm)，流动相：乙腈-0.4%磷酸（14∶86）；柱温：35℃；流速：1.0 ml/min；检测波长：236 nm；灵敏度：0.001 AUFS；进样量：20 μl。 2.2 标准曲线制备 精密称取绿原酸对照品适量，加乙酸乙酯溶解并稀释成0.3 mg/ml的绿原酸溶液，精密量取1、2、3、4、5 ml，分别置25 ml量瓶中，加乙酸乙酯稀释至刻度，摇匀，过滤。分别取20 μl注入色谱仪、记录峰面积，以峰面积（Y）为纵坐标，进样量为横坐标（X）进行线性回归，结果线性范围为0.24～1.2 μg。峰面积与进样量呈良好线性关系，回归方程为Y=196+1.57×104X，r=0.9997。 2.3 空白试验 按处方中药比例及原工艺，配制不含金银花的空白制剂，再按供试品溶液制备方法制备并测定，结果空白溶液在绿原酸对照品相同保留时间处未有色谱峰。 2.4 样品溶液的制备 精密吸取样品2 ml置100 ml量瓶中，加乙酸乙酯适量，超声处理30 min使其溶解，放冷至室温，加乙酸乙酯至刻度，摇匀、滤过。精密量取续滤液10 ml，置25 ml量瓶中，加乙酸乙酯至刻度，摇匀，即得。 2.5 重现性试验 取同一样品5份，按“2.4”项下方法制备分别取20 μl进样测定，结果绿原酸含量RSD为2.0%。 2.6 精密度考察 依法对同一份样品分别进行5次测定，结果RSD为0.80%。 2.7 加样回收率试验 分别精密量取3份已测知含量的样品1 ml置100 ml量瓶中，分别加入高中低三种浓度绿原酸对照品1 ml，加乙酸乙酯适量。测定回收率，结果见表1。 表1回收率试验结果 2.8 样品溶液的测定 按“2.4”项下方法制备样品，取20 μl进样，测定，计算3批样品绿原酸含量分别为：1.586 mg/ml、1.552 mg/ml、1.512 mg/ml。 3 讨论 通过比较和考察[1～3]，本文选择了中国药典（2000版一部）金银花含量测定中的色谱条件，可使银连合剂中绿原酸很好地分离，线性关系良好。 本方法简便、快速、重现性好，为银连合剂的质量控制提供了客观的定量评价方法。 [参考文献] [1]国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].一部.北京：化学工业出版社，2000.177. [2]王静，常新全，刘俐纯，等. HPLC测定感冒止咳颗粒剂中绿原酸和黄芩苷的含量[J]. 中成药，2004，26（3）：206. [3]张晓菊，刘学兰. 复方利咽宁口服液中绿原酸含量的HPLC测定及稳定性研究[J]. 中草药，2004，35（5）：527-528. （收稿日期：2006-12-22） 注：本文中所涉及到的图表、注解、公式等内容请以PDF格式阅读原文。 1