免疫印迹法在检测胰岛β细胞自身抗体中应用.doc

免疫印迹法在检测胰岛β细胞自身抗体中应用摘要：目的：探讨免疫印迹法在检测胰岛β细胞自身抗体中的可用性。方法：用免疫印迹法检测22例I型糖尿病患者和260例2型糖尿病患者血清中自身抗体ICA、IAA、GADA。结果：1型糖尿病组中ICA、IAA、GADA的阳性率分别是36.4％、27.7％、77.3％；2型糖尿病组中3种自身抗体的阳性率分别是10.4％、9.2％、9.6％。结论：采用免疫印迹法测ICA、IAA、GADA方法简便，特异性高，经济实惠，对DMl的预测和诊断具有重大意义。 关键词：免疫印迹法：胰岛细胞抗体；胰岛素抗体；谷氨酸脱羧酶抗体；糖尿病 中图分类号：R466.6　文献标识码：B　文章编号：1008－2409(2007)04－0805－02 糖尿病是一种代谢综合征，其主要临床表现是高血糖。它是由于各种不同的病因通过胰岛β细胞分泌胰岛索不足及／或周围组织细胞对胰岛素的生物效应有抵抗性或耐受性，或者两者兼有而使血糖升高。主要分为1型糖尿病、2型糖尿病、其他特殊类型糖尿病和妊娠糖尿病。1型糖尿病是由于自身免疫系统错误地攻击和损伤胰岛β细胞，从而使胰岛素的合成和分泌减少或完全缺乏的自身免疫性疾病；2型糖尿病以胰岛素抵抗为主伴胰岛素分泌不足。对确诊为糖尿病的患者进行准确的分型是对其实施预防及治疗的基本前提。糖尿病患者在无症状期及发病后一定时期中可以检出多种糖尿病自身抗体，其中胰岛细胞抗体(ICA)、胰岛自身抗体(IAA)和谷氨酸脱羧酶抗体(GADA)的检测可用来评价1型糖尿病的发病进展程度及鉴别不同类型的糖尿病。因此，准确检测这几个自身抗体尤为重要，笔者运用免疫印迹法分别对1型糖尿病和2型糖尿病患者检测ICA、IAA、GADA，旨在探讨免疫印迹法检测这三种自身抗体在临床检查中的可行性。现报道如下。 1　材料与方法 1.1　研究对象 282例为2006年1～12月在贵港市人民医院内分泌科住院的糖尿病患者，其中1型糖尿病患者22例，2型糖尿病260例。 1.2　仪器 B320A型离心机、BT―1.0型生化摇摆平台。 1.3　方法 1.3.1　标本采集及要求静脉取血2～5ml，置试管待凝固后离心血清，血标本保存于2～8℃，在24h内不能测试的标本应放－20℃保存，严重溶血、有絮状物或霉变的血清标本会影响测试。 1.3.2　检测方法ICA、IAA、GADA均采用深圳市伯劳特生物制品有限公司糖尿病自身抗体免疫印迹试剂盒测定。严格按照试剂盒说明书的操作方法进行。结果判断：将印迹膜上起始线与标准带起始线对齐．观察阳性显色区带与对应的标准带位置即可判断显色区带是何种自身抗体。 1.4　统计学处理 数据组间及组内阳性率的显著性差异比较采用x2检验，P0.05)。 3　讨论 1型糖尿病多因胰岛p细胞自身免疫型破坏所致，故胰岛细胞自身抗体检测是鉴别1型糖尿病的敏感指标。在1型糖尿病患者的血清中可以检出多种针对胰岛细胞及其细胞成分的自身抗体，如GADA、ICA和IAA等。成年糖尿病患者正确分型比较困难，但如果在糖尿病确诊时同时伴有胰岛自身抗体的存在，对糖尿病患者分型鉴定，尤其是3年内对胰岛素依赖性是高敏感的。Brog等对成年发病的糖尿病患者的随访研究发现，81％的GADA阳性患者12年后仍保持阳性。早期准确地预报1型糖尿病的发生将有助于干预胰岛细胞破坏，最大限度地保持β细胞体积，阻止或减缓其发生和发展。 免疫印迹法是一种新的抗原抗体结合反应的分析方法。其原理利用蛋白印迹技术(Western blot)，将胰岛细胞提取的混合蛋白抗原(含有胰岛素、谷氨酸脱羧酶和胰岛细胞抗原等多种细胞蛋白成分)用SDS一聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)，按分子量大小依次分开．再通过印迹技术转移至印迹膜上，其印迹膜条上即含有按分子量大小不同排列的各种胰岛细胞自身抗原成分。将其放入反应槽与待测血清反应，如待测血清含有自身抗体，将会与相应抗原结合，再加入酶联免疫显色剂就会在抗原、抗体结合位置出现显色区带与标准带对照，即可判断待测血清中含有何种抗体。整个过程操作简单，不需要特殊仪器，结果重复性较好。本研究结果可以看出，本法的阳性率与ELISA法检测ICA、IAA、GADA的阳性率没有明显差异。 综上所述，由于用免疫印迹法测糖尿病自身抗体ICA、IAA、GADA敏感性高，特异性强，操作简单，不需特殊仪器等优点，将被实验室和临床检验普遍接受，该技术的普及将成为必然。 [责任编辑　高莉丽　王慧瑾] 1