哮喘患儿血管紧张素转换酶基因多态性初步探究.doc

哮喘患儿血管紧张素转换酶基因多态性初步探究[摘要] 目的 探讨哮喘患儿血管紧张素转换酶（angiotensin converting enzyme，ACE）的基因型及其分布。 方法 提取87例哮喘患儿（实验组）和58例正常儿童（对照组）外周血基因组DNA，用PCR方法检测其ACE的基因型。 结果 实验组基因型为缺失型纯合子DD型38例、缺失型杂合子ID型19例、插入型纯合子II型30例，对照组基因型为缺失型纯合子DD型9例、杂合子ID型18例、插入型纯合子II型31例，两组基因型构成差异有统计学意义（P 0.05），具有可比性。 1.2 ACE基因型检测方法 所有病例采集静脉血2 mL，使用Axygene全血基因组DNA抽提试剂盒（批号：Q抽提基因组DNA；ACE的聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR）试剂盒购自大连宝生物公司，其正向引物序列为5’-CTGGAGACCACTCCCA-3’，反向引物序列为5’-GATGTGGCCATCACATTCGCAGAT-3’，PCR反应体系包括基因组DNA 2 μL、10×PCR buffer 5 μL、dNTP 25 mmol/L 3 μL、Taq DNA 聚合酶0.5 μL （2.5 U），MgCl2 3 μL（25 mmol/L），正向引物1 μL、反向引物1 μL、加水至50 μL。PCR反应条件：94℃预变性10 min、94℃ 45 s、58℃ 45 s、72℃ 90 s，30个循环周期，72℃延长10 min。取反应产物5 μL加上样缓冲液1 μL，在2%的琼脂糖凝胶电泳30 min，在紫外灯下观察结果并且摄影。 1.3 统计学方法 采用SPSS 13.0统计软件进行处理，计数资料采用χ2检验，P 表1 哮喘患儿ACE基因型检测结果[n（%）] 表2 哮喘患儿ACE等位基因频率[n（%）] 3 讨论 在肾素-血管紧张素系统（renin-angiotensin system，RAS）或肾素-血管紧张素-醛固酮系统（renin-angiotensin-aldosterone system，RAAS）中，血浆中的肾素底物（即血管紧张素原），在肾素的作用下水解，产生一个十肽，为血管紧张素Ⅰ。血管紧张素Ⅰ本身没有生物学活性，但在肺循环血管内皮表面的ACE的作用下，血管紧张素Ⅰ水解为有活性的血管紧张素Ⅱ。研究发现，在哮喘发作时，其肾素和血管紧张素Ⅱ在血浆内的浓度明显升高[4]。血管紧张素Ⅱ在哮喘中的作用主要表现在以下2个方面[5]：首先血管紧张素Ⅱ能够导致呼吸道平滑肌收缩，引发哮喘的发作；其次，血管紧张素Ⅱ能够激活炎症因子如缓激肽、P物质等炎症因子，加快哮喘的发生和发展。 ACE基因全长21 kb，由26个外显子和25个内含子组成[6]。目前对ACE的基因多态性的研究表明，ACE第16个内含子中可以存在一段287 bp插入片段（insertion，I），也有个体缺失此片段（deletion，D），根据个体等位基因是否存在这一插入片段，ACE基因存在着DD，ID和II三种基因型[7]。研究表明，由于不同基因型，ACE的活性并不相同，DD型的ACE活性最强，ID型次之，II型最弱[8]。 笔者对ACE基因型检测结果表明，哮喘患儿缺失型纯合子（DD基因型）的比例明显高于正常儿童，哮喘患儿的D等位基因频率明显的高于正常儿童，因此推测ACE基因型为缺失型纯合子的儿童可能更加容易发生哮喘，这也提示ACE基因中是否存在插入片段可能和哮喘的发生有关。国外对成人ACE多态性和哮喘之间的研究也同样表明，ACE基因型为缺失型纯合子发生哮喘的可能性更高[4]。 [参考文献] [1] Picconatto WJ，Ross SK，Carlson AM. Athletes and asthma [J]. Minn Med，2010，93（12）：33-36. [2] Zhang Y，Tian C，Zhang J，et al. The -159C/T polymorphism in the CD14 gene and the risk of asthma： a meta-analysis [J]. Immunogenetics，2011，63（1）：23-32. [3] 何云，谢晓虹，邓昱，等.哮喘儿童吸入丙酸氟替卡松后外周血单个核细胞Foxp3和磷酸化STAT5的变化[J].临床儿科杂志：英文版，2011，29（1）：1-7. [4] Prieto MC，Gonzalez-Villalobos RA，Bot