对沙眼衣原体感染细胞促凋亡蛋白表达影响.doc

对沙眼衣原体感染细胞促凋亡蛋白表达影响[摘要] 目的：研究蛋白酶体抑制剂MG132对沙眼衣原体感染细胞促凋亡蛋白Bim、Puma表达的影响，探讨沙眼衣原体抑制宿主细胞凋亡的可能机制。方法：以沙眼衣原体（D血清型）感染Hela229细胞，用不同浓度MG132作用后，Western-blot检测Bim、Puma蛋白质表达水平的变化。结果：沙眼衣原体感染12 h后Bim、Puma的表达降低；24 h后完全消失。MG132能抑制Bim、Puma的表达下降。结论：沙眼衣原体感染Hela229细胞后可降低促凋亡蛋白Bim、Puma蛋白质的表达；MG132可阻止这一作用，Bim和Puma的降解依赖蛋白酶体的活性。 [关键词] 沙眼衣原体（D血清型）；Hela229细胞；Bim；Puma；细胞凋亡 [中图分类号] Ｒ[文献标识码]A [文章编号]1673-7210（2008）08（c）-011-02 Effects of MG132 on Proapoptotic Proteins in Chlamydia trachomatis -infected Cell YANG Zhi-ying , CHEN Fu-chun, OU Lu-ming,YU Xiao-fen ,CAO Yan-hua ,YANG fan (Department of Basical Medicine,Xiangnan University,Chenzhou423000,China) [Abstract] Objective：To explore the effects of MG132 on Proapoptotic Proteins Bim,Puma and the mechanism of apoptotic inhibition in Chlamydia trachomatis-infected Hela229 cells. Methods：The experiments cell were treated with the proteasome inhibitor MG132. Western-blot was applied to detect the expression of Bim,Puma at protein level. Results：Bim, Puma were degraded approximately 12 h after infection with C. trachomatis and disappeared at 24 h. MG132 can inhibit the degradation. Conclusion:The levels of Bim,Puma were reduced by infection with C. trachomatis; the reduce was prevented by MG132. Degradation of Bim,Puma requires proteasomal activity. [Key words] Chlamydia trachomatis（serovar D）;Hela229 cell;Bim; Puma;Apoptosis 沙眼衣原体（Chlamydia trachomatis,Ct）具有较宽的疾病谱，可引起沙眼、泌尿生殖道感染、关节炎等多种疾病，严重危害人类健康。易导致持续感染是沙眼衣原体感染和致病的一个特点[1]。能抑制宿主细胞凋亡可能与持续感染密切相关。已有研究表明沙眼衣原体能在不同环节有效地干扰宿主细胞的线粒体凋亡信号通路[2]。我们前期研究也发现沙眼衣原体D血清型能抑制宿主Hela229细胞的凋亡[3]。BH3-only蛋白是Bcl-2家族中具有凋亡启动作用的亚家族，通过与bcl-2/bax相互作用启动“内源性”凋亡途径，其中Bim和Puma有着最显著的作用[4]。为此，本研究旨在探讨沙眼衣原体感染Hela229细胞后对促凋亡蛋白Bim、Puma表达的影响以及蛋白酶体抑制剂MG132作用沙眼衣原体感染的Hela229细胞后Bim、Puma表达的变化，从而探究沙眼衣原体抑制宿主细胞凋亡的机制。 1材料与方法 1.1材料 沙眼衣原体（D血清型，中南大学湘雅医学院免疫学教研室惠赠）、Hela229细胞（人宫颈癌上皮细胞系，ATCC CCL-2.1，中科院上海细胞生物学研究所）、DMEM（GIBCO公司）、放线菌酮（SIGMA进口分装）、沙眼衣原体荧光免疫诊断试剂盒（北京美迪科公司）、蛋白酶体抑制剂MG132（Sigma公司）、蛋白质标准溶液（晶美公司）、蛋白质Marker（MBI公司）、兔抗人Bim单克隆