抗血栓药材有效部位筛选探究.doc

抗血栓药材有效部位筛选探究摘　要：目的：观察抗血栓药材有效部位的活血化瘀作用。方法：采用小鼠脑偏瘫、血小板聚集、纤溶法、玻璃毛细管法、高脂血症模型等实验方法，测定药物对小鼠脑血栓的保护率，血小板聚集抑制率、纤溶率、凝血时间及血脂水平的影响。结果：甜茶藤、榕树须、黄杞叶、首乌藤等有效部位抗血栓效果较好；榕树须、黄杞叶和甜茶藤有一定的抗血小板聚集作用；全部水洗脱物在一定剂量范围内对大鼠血浆纤维蛋白均具有一定的纤溶作用；榕树须、山楂叶、黄杞叶、甜茶藤等能明显延长凝血时间，并能明显降低TC和TG水平。揭示榕树须、山楂叶、黄杞叶、甜茶藤等具有较好的抗离血栓、抗血小板聚集、抗凝血和降脂作用。结论：为进一步分离有效成分提供了科学依据。 关键词：抗血栓药材；有效部位；筛选实验 中图分类号：R965．1　文献标识码：A 文章编号：1007―2349(2007)02―0034－02 广西许多特色中草药在民间应用证实具有活血化瘀作-用，对血栓性疾病有良好的治疗效果。在我们前期筛选研究中，已观察到柿子叶、两面针、黄杞叶等水提物和醇提物具有抗脑血栓、降低血粘度、抑制血小板聚集等作用[1～2]。我们对初筛有效的提取物经大孔树脂做了进一步的分离提取，得到了许多不同的有效部位，继续进行抗血栓、抗凝、溶纤和降血脂等筛选试验。现将实验结果报告如下。 1 实验材料 1．1 药物　黄皮叶(Clausena lansium)、黄杞叶(Engelhardtiaroxburghiana Wall．)、榕树须(Ficus microcarpa L)、甜茶藤(Ampelopsis grossedentata)、大果山楂叶(Crataegusscabrifolia)、首乌藤(Polygonum multiflorum Thunb．)、两面针(Zanthoxylum mitidum)等药材水提物经过大孔树脂过滤，水洗脱得有效部位，由广西中医药研究所化学室提供。阿司匹林肠溶片，湖南南亚大制药有限公司生产，批号盐酸肾上腺素注射液，广州明兴制药厂产品，批号MBS001。复方丹参注射液，江苏康恬制药有限公司生产，批号：060105。洛伐他汀胶囊为扬子江药业集团有限公司产品。复方丹参片，天津天士力制药股份有限公司．批号：2006304。 1．2试剂　胶原蛋白为Worthington biochemical corporation产品：腺苷――二磷酸钠盐(ADP)，中国医药集团上海化学试剂公司，批号含钙凝血酶干粉，上海荣盛生物技术有限公司生产，批号血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)检测试剂盒均为四川省麦克科技有限责任公司产品。 1．3动物 昆明种小鼠，体重18～22g；Wistar大鼠，体重200～250g，雌雄各半，均为清洁级动物，由广西医科大学实验动物中心提供，许可证号：SCXK桂2003～0003。 1.4仪器　BS631型血小板聚集仪，北京生化仪器厂生产。722型光栅分光光度计，上海分析仪器三厂产品。电热恒温水浴箱，上海医疗器械七厂生产。 2方法与结果 2．1抗脑血栓实验[3]。取小鼠100只，随机分为生理盐水组、阳性药阿司匹林(80mg／kg)组和各药材水洗脱物组，每组10只。各药物组每天灌胃给药1次，生理盐水组给予等体积的生理盐水，连续5d。于末次给药后1h，小鼠尾静脉注射胶原蛋白及肾上腺素联合诱导剂(胶)原蛋白90ug／只，肾上腺素9ug／只)。注射后观察15min内小鼠偏瘫的未恢复数，计算药材对小鼠脑血栓的保护率。结果见表1。 结果表明：甜茶藤、榕树须、黄杞叶、首乌藤等抗血栓效果较好，其次是黄皮叶、山楂叶、两面针。提示这些有效部位具有一定的抗小鼠脑血栓作用。 2．2对体外ADP诱导大鼠血小板聚集的影响[4]　取体重200～250g大鼠，用3％戊巴比妥钠0．1ml／100g体重腹腔注射麻醉后，剖开腹腔，从腹主动脉取血，注入盛有3．8％枸橼酸钠溶液试管中，轻轻摇匀，以100r／min离心5min，吸取上清液为富血小板血浆(PRP)，剩余血继续以3000r／min离心10min，吸取上清液为贫血小板血浆(PPP)。将BS631型血小板聚集仪打开，预热30min后，用PRP调零(0％)，用PPP调幅度(100％)。测定时对照管取PRP0．4ml及生理盐水20ul，给药管取0．4mlPRP及药液20ul(大剂量)、10ul(小剂量)放入比浊管中，在37℃恒温及1300r／min搅拌条件下加入ADP50ul(50ug／ml)，用自动平衡仪以20mm／min纸速记录对照管和给药管血小板聚集曲线，根据所记录的曲线计算血小板聚集百分数(％)。结果见表2。