单克隆抗体间接免疫荧光（i.pdf

维普资讯 畜牧与兽医 2007年 第39卷 第9期 ·47· 单克隆抗体间接免疫荧光 (IFA)检测猪附红细胞体 朱绍辉 ，吴延功 ，单 虎h，姜同泉 ，张 浩 (1．青岛农业大学动物科技学院，山东 青岛 266109； 2．中国动物卫生与流行病学研究中心，山东 青岛 266032) 摘要 ：为建立利用单克隆抗体检测猪附红细胞体病的间接免疫荧光 (IFA)方法，用抗猪附红细胞体的单克隆抗体，对48份疑似猪附红细胞体感 染的病猪猪血进行免疫荧光检测，并与血涂片镜检及 PCR检测方法进行比较，结果显示 IFA检测的阳性率为 68．75％，与PCR检测阳性率为 77．08％符合率较高，比血涂片的瑞氏和姬姆萨染色镜检阳性率高出近30个百分点；而用猪肺炎支原体、猪链球菌和猪巴氏杆菌作对照，结果均 呈阴性。建立的用抗猪附红细胞体的单克隆抗体检测猪附红细胞体病的IFA特异性强，敏感性高；检测临床样品的结果准确可靠。 关键词 ：猪附红细胞体；间接免疫荧光；单克隆抗体 中图分类号：s858．28 文献标识码：B 文章编号：0529-5130(2007)09-0047-02 附红细胞体病 (Eperythrozoonsis)是 由附红细胞体 测均为阴性的猪血作为阴性对照。 (Eperythmzoon，EH)寄生于人 、动物红细胞表面、血浆及骨 1．3．2 抗原包被 髓内，引起的一种以贫血、黄疸、发热等为主要临床症状的人 取标准阳性和阴性血样涂片，晾干，并设空白对照。 畜共患病 ¨ 】。猪附红细胞体病在世界范围内已有广泛报道， 1．3．3 荧光二抗的稀释 我国也有多个省份报道了该病。该病不仅导致畜产品质量和产 分别用0．01％的伊文思蓝和0．01mol／LPBS稀释的FITC 量降低，动物生育力下降，而且还可导致动物发生严重的临床 标记的山羊抗鼠IgG抗体 (1：100，拟稀释倍数)。 症状甚至死亡，阻碍了畜牧业的发展，造成了重大的经济损 1．3．4 IFA测定 失。目前对该病的诊断仍多采用镜检的方法，但由于一些人为 将已包被好的2组标准阳性和阴性对照的玻片，用冷丙酮 的因素及该病多呈混合感染，常会发生误诊。本研究从简单、 和甲醛等比例混合液固定15min，室温下干燥，加入相应编号 快速 、经济 、准确的角度出发 ，建立了首次用抗猪附红细胞体 的抗猪附红细胞体的单克隆抗体20 L，置湿盒中37℃下作 的单克隆抗体检测附红细胞体的间接免疫荧光试验，以探索一 用30min，用PBS轻轻冲洗 ，然后浸泡于PBS盒 中，于电动 种更为准确实用的检测方法。 摇床上轻微摇动，连续洗涤3次。待免疫荧光片干燥后将其中 一 组标准 阳性和阴性抗原及空白对照玻片中加入 10 L用 1 材料与方法 0．01％伊文思蓝稀释的荧光抗体；另一组加入 10 用0．01 1．1 材料 mol／LPBS稀释的荧光抗体。置湿盒中37℃下作用30min，用 附红细胞体标准阳性抗原、阴性抗原为本试验室制备；猪 PBS轻轻冲洗 ，方法同前。干燥后滴加甘油-PBS缓冲液，覆 肺炎支原体为中国农业大学动物医学院惠赠 ；灭活的猪链球菌 加盖玻片。置荧光显微镜下观察。若设立的标准阳性玻片的视 和猪巴氏杆菌为中国动物卫生与流行病学中心保存菌种；疑似 野中有数个特异性黄绿色荧光时，而设立的阴性对照的视野中 猪附红细胞体病病猪48份猪血从山东青岛、烟台地区采集 ； 没有特异性黄绿色荧光时