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老鹳草凝胶质量标准探究摘要：目的：建立老鹳草凝胶的质量控制方法。方法：采用薄层色谱法(TCL)鉴别老鹳草凝胶中槲皮素、没食子酸；采用高效液相色谱(HPLC)测定槲皮素的含量。结果：色谱图斑点清晰、阴性对照无干扰。槲皮素进样量在0.002μg～2.544μg(r=0.99998)范围内与峰面积呈良好的线性关系，平均回收率为98.43％，RSD＝1.65％(n＝9)。结论：本方法简便、快速、准确，可作为该制剂质量控制的方法。 关键词：老鹳草凝胶；薄层鉴别；高效液相色谱法；没食子酸；槲皮素；含量测定 中图分类号：R284.1　文献标识码：A　文章编号：1007-2349(2010)05-0064-02 老鹳草凝胶是在老鹳草软膏(《中国药典》一部，2005年)的基础上改剂型新药，该药具有除湿解毒，收敛生肌的功效，在临床上用于治疗湿毒蕴结所致的湿疹、痈、疔、疮及小面积水、火烫伤。 有关老鹳草化学成分的深入研究报道不多，大多文献报道的都是其化学成分的定性研究内容，定量研究几乎没有。老鹳草的主要化学成分包括鞣质、挥发油、黄酮和有机酸等。有关老鹳草的药理作用报道主要集中在抗炎镇痛、抗菌、抗病毒和抗氧化等几个方面。抗炎镇痛作用的活性物质主要在醋酸乙酯部分和水提部分，抗菌作用的活性物质主要在乙醇提取物部分，抗病毒作用的活性物质主要在水煎醇沉后的黄酮部分，抗氧化作用的活性物质主要是鞣质部分。药典老鹳草软膏的功能主治为除湿解毒，收敛生肌。结合以上两个方面，初步确定以槲皮素为含量测定检测指标。槲皮素具有广泛的药理作用，有抗氧化及清除氧自由基作用，能降低血压、保护心肌缺血再灌注损伤、免疫增强功能及抗癌、抗菌、抗病毒和镇痛等作用。原药典标准仅有颜色鉴别一项，专属性不强，不利于质量的控制。本文采用薄层色谱法(TLC)对其主要成分槲皮素和没食子酸进行了定性研究，并采用高效液相色谱法(HPLC)测定了其主要成分槲皮素的含量。经反复实验，确定的检测方法分离度高、重现性好、阴性无干扰，方法可行。 1　仪器与试药 1.1　仪器美国Agilent 1100高效液相色谱仪，带四元泵；DAD检测器；自动进样器；在线真空脱气机；智能化柱温箱及HP化学工作站；Mettler AG285型电子分析天平。 1.2　试药老鹳草凝胶由云南省药物研究所制剂室提供，槲皮素(批号：100081－200406，供含量测定用)、没食子酸(批号：831－9501，供含量测定用)对照品购自中国药品生物制品检定所。所用流动相甲醇为色谱纯，处理样品的甲醇为分析纯，磷酸、盐酸为分析纯，水为超纯水。 2　方法与结果 2.1　鉴别试验取本品2g，加10 mL水溶解，加乙醚提取2次，每次15 mL，弃乙醚层，水层加10 mL稀盐酸，水浴加热1 h，迅速冷却后滤过，加乙酸乙脂20、15、15 mL提取3次，弃水层，乙酸乙脂层挥干，残渣加甲醇2 mL溶解，作为供试品溶液，另取阴性样品2g，照供试品方法制得老鹳草阴性样品溶液。再分别取槲皮素和没食子酸对照品适量，加甲醇制成每1 mL含2 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年，附录ⅥB)试验，吸取上述3种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯一乙酸乙脂一甲酸(10：5：3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以3％三氯化铝显色，在105℃烘2 min，放冷，在254 nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点且阴性对照液无干扰。结果见图1。 2.2　含量测定 2.2.1　色谱条件Waters XTerra MS Ci8柱(5μm，4.6×250 mm)；流动相为甲醇－0.2％磷酸(50：50)，检测波长为370 nm，柱温35℃。理论板数按槲皮素峰计算应不低于3000；其他应符合药典要求。 2.2.2　供试品溶液的制备取样品约5g，精密称定，置50 mL量瓶中，加入甲醇－25％盐酸溶液(3：1)50 mL，精密称定重量。80℃水浴回流1.5 h，迅速冷至室温，甲醇－25％盐酸溶液(3：1)补重，滤过，即得。 2.2.3　对照品溶液的制备精密称取槲皮素对照品适量，置100mL量瓶中，加甲醇制成每1mL含0.02 mg的溶液，即得。 2.2.4　阴性样品溶液的制备取不含老鹳草提取物的凝胶基质2g，同供试品溶液制备方法制成阴性样品溶液。 2.2.5　系统适用性实验按2.2.1中的色谱条件，分别取对照品溶液、阴性样品溶液、供试品溶液进样10 μL测定，分析结果见图2。结果被测组分分离效果较好，槲皮素峰达基线分离，理论板数按槲皮素峰计算大于5000。 2.2.6　线性关系考察精密称取槲皮素对照品25.44 mg，置100