超声-表面活性剂法提取黄柏生物碱工艺探究.docVIP

超声-表面活性剂法提取黄柏生物碱工艺探究摘 要：目的：研究超声-表面活性剂法在黄柏生物碱提取工艺中的应用。方法：采用单因素实验和正交实验考察不同因素对超声-表面活性剂法提取生物碱的影响，优化最佳工艺参数。结果：最佳提取工艺为提取温度60 ℃，乙醇浓度80%，活性剂TW60，料液比为30∶1，超声30 min，提取率达到7.24%，高于文献值6.37%。结论：超声-表面活性剂对黄柏生物碱的提取，具有提取率高、快速、有效等优点。 关键词：超声提取；表面活性剂；黄柏；生物碱 中图分类号：R284.2 文献标识码：A 文章编号：1007-2349（2011）08-0059-03 黄柏为芸香科植物黄皮树（Phellodendron chinese Schneid）的干燥树皮，性苦、寒，具有清热燥湿、泻火除蒸、解毒疗疮的功效［1］。现代药理学表明黄柏具有较强的广谱抗菌性，对葡萄球菌有较强的抑制作用［2］，同时具有抗溃疡、降压、抗心律失常等作用。黄柏生物碱为其主要有效成分［3］，具有抗心律失常，抗心力衰竭，抗肿瘤等活性［4］。 超声提取（Ultrasonic extraction）技术主要是利用超声波的空化作用加速植物有效成分的浸出提取，同时可以使药物组织内部的温度瞬时升高，加速有效成分的溶解［5］。表面活性剂［6］是一种具有两亲结构、能够在界面上富集并显著改变界面性质的特殊化学物质，具有润湿、渗透、增溶等功能特性。本文对几种表面活性剂进行考察，与超声技术进行结合，以盐酸小檗碱为指标，优选出超声―表面活性剂法提取黄柏生物碱的最佳工艺。 1 材料与方法 1.1 药材、仪器及试剂 药材：干燥川黄柏树皮（购自浙江磐安中药材市场）粉碎过40目筛，干燥保存。试剂：盐酸小檗碱对照品（中国药品生物制品检定所）；去离子水；乙醇（分析纯）；SDS、CATB、TW60均购自上海化学试剂公司。仪器：可见-紫外分光光度计，超声波提取仪，waters2695液相色谱仪。 1.2 方法和结果 1.2.1 标准品液和供试液的制备 精密称取真空干燥至恒重的盐酸小檗碱对照品5.0 mg，加去离子水定容于100 mL容量瓶中，摇匀，即得浓度为0.05 mg/mL的盐酸小檗碱标准品储备液，备用。分别配质量分数0.5%的表面活性剂，装入具塞的三角烧瓶中，之后加入川黄柏1.0 g，摇匀，超声提取，合并滤液，定容至40 mL，分别取0.1 mL，稀释至50 mL，摇匀，即得供试液。 1.2.2 标准曲线的建立 精密移取盐酸小檗碱储备液0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL于50 mL容量瓶中，稀释至刻度，用去离子水做空白，在345 nm波长下分别测得吸光度3次，取均值。标准曲线见图1。用最小二乘法经线性回归，得盐酸小檗碱浓度C与吸光度A的回归方程：A=64.865C-0.0053，r=0.9994。结果表明，盐酸小檗碱在1.0~5.0 μg/mL浓度范围内线性关系良好。见图1。 2 实验内容 2.1 单因素实验 为考察超声波提取法各因素对黄柏总生物碱提取率的影响，对提取的溶剂浓度、温度、料液比、提取时间四个因素进行单因素试验。按2.1.2中样品盐酸小檗碱含量的测定步骤测吸光度，求出盐酸小檗碱提取率。 2.1.1 乙醇浓度对盐酸小檗碱提取率的影响 精密称取黄柏药材1 g，分别加入10%，30%，50%，70%，90%浓度的乙醇，于温度60 ℃，超声提取30 min，由图2可知，30%以上浓度的乙醇对黄柏总生物碱的提取率影响总体并不显著，在70%乙醇浓度时提取率最大，之后提取率反而随浓度的升高有所降低，故本试验选取60%~80%这一范围作为考察范围。见图2。 2.1.2 温度对提取率的影响 精密称取黄柏药材1 g，加入70%浓度的乙醇，于20 ℃、30 ℃、40 ℃、50 ℃、60 ℃的条件下超声提取30 min，由图3可知，30 ℃~50 ℃时对黄柏总生物碱的提取率影响总体并不显著，在60 ℃时提取率最大，因此在试验中均采用60 ℃。见图3。 2.1.3 料液比对提取率的影响 精密称取黄柏药材1 g，加入70%浓度的乙醇，料液比分别为10∶1、20∶1、30∶1、40∶1、50∶1，于温度60 ℃超声提取30 min，由图4可知，料液比高于30∶1时盐酸小檗碱的提取率有所下降，在30∶1时提取率最大，因此本试验选取10∶1、20∶1、30∶1这3个梯度作为考察对象。见图4。 2.1.4 超声时间对提取率的影响 精密称取黄柏药材1 g，加入70%浓度的乙醇，料液比30∶1于60 ℃超声提取10、20、30、40 min，由图5可知，超声30 min时盐酸小檗碱的提