一起腺病毒引起呼吸道感染暴发调查.doc

腺病毒3型急性呼吸道感染暴发流行的病原学诊断 经验交流 袁跃彬1 ，赵京生1 ，段新科1 ，王勇2 ，毛远丽3 ，李子健4 (467000 河南 平顶山，解放军第152中心医院1；467000？河南 平顶山？？，解放军军事医学科学院2；467000？河南 平顶山？？解放军传染病总医院3；，467000？河南 平顶山？？，济南军区疾病控制中心4) [通信作者] 袁跃彬， E-mail: yuanyuebin152@ 　　2009年2月, 驻豫某部队暴发了大面积急性呼吸道感染, 疫情波及整个营区,16 d 内累计报告病例225例。临床特征以发热为主要症状，伴有咽痛、咳嗽等上呼吸道症状，部分病例病情严重，出现胸闷、呼吸困难，该病传染性强,疫情蔓延快,时值高致病性禽流感在全国呈区域性流行，多个省市有人禽流感病例的报道，且死亡率高达64.3%[1]，对广大官兵的心理状况影响巨大。疫情上报的当天，各级卫生部门，包括体系医院、军区卫生部、总后卫生部和国家卫生部相关专家即到达现场。经过病原体筛查，第2天即初步诊断病原体为腺病毒，进一步的实验室诊断证实引起本次急性呼吸道感染暴发流行的病原体为腺病毒3型。实验室结果和临床特征相吻合[2]。病原学的诊断为消除官兵的恐慌情绪及疫情的最终控制奠定了基础。现报告如下。 1 　材料与方法 1.1 标本来源 采集发病3 d内急性期患者咽拭子标本30份；52 例患者发病3 d内急性期血清和发病1 个月？后恢复期配对血清；现场调查刚开始时，立即寻找到20例发病8 d以上的患者，采集血清，利用一定的发病时间，筛查病原体IgM；同时采集部分未发病战士血清，作为对照。标本采集当天，冰盒保存，空运到解放军军事医学科学院经行实验室检测。 病原体筛查 IgM抗体筛查 采用免疫荧光方法，对20份发病10 d后患者的血清进行了呼吸道常见20种病原体IgM抗体的筛查，包括腺病毒(AD) 、呼吸道合胞病毒(RSV) 、甲型和乙型流感病毒直接免疫荧光抗体(CHEMI2CON 公司)、科萨奇病毒、埃可病毒、肺炎支原体、肺炎衣原体、流感嗜血杆菌、肺炎克雷伯杆菌、军团菌等。 抗原筛查 咽拭子标本粗离心,取脱落细胞沉淀涂片,采用直接免疫荧光试验(DIF) 快速检测病原体抗原，包括甲型和乙型流感病毒、禽流感病毒、腺病毒、肺炎支原体、军团菌等。 病原体培养 咽拭子标本经粗离心后,标本上清液经抗生素处理6 h后分别接种HepG2 Ⅱ、HeLa、 RD和Vero培养基,经行病毒分离培养，次日起观察是否产生细胞病变。同时，咽拭子标本分别接种中国蓝、BCYE2α、巧克力及血平板等培养基,置37 ℃、5 %CO2 孵育,进行细菌培养。 病毒核苷酸检测 病毒培养后，取病变细胞培养上清液腺病毒(AD)，应用逆转录聚合酶链反应（RT2PCR RT-PCR？）,参照文献报道常见的急性上呼吸道感染腺病毒基因类型[3]，设计合成了扩增核苷酸的引物：Ad1，扩增产物长度440 bp，Ad3，扩增产物长度440 bp， Ad4，扩增产物长度185 bp， Ad5，扩增产物长度949bp，Ad7，扩增产物长度391 bp。 引物由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。 IgM抗体及IgG抗体检测 应用德国IBL公司病毒系列试剂盒（腺病毒IgM））χ2检验，计量资料行t检验。 2 　结果 2.1 病原体筛查结果 　 20份发病10 d后血清IgM抗体筛查结果是：腺病毒IgM阳性数9份，阳性率45%，流感、副流感、呼吸道合胞病毒(RSV) 、SARS、冠状病毒、禽流感病毒、肺炎克雷伯杆菌、军团菌病IgM抗体阳性率均为0，肺炎支原体IgM抗体阳性2份，阳性率10%，肺炎衣原体抗体1份，阳性率5%。DIF 快速抗原检查结果是：30份咽拭子中21份腺病毒抗原阳性，阳性率70%， 甲型和乙型流感病毒、禽流感病毒、肺炎支原体、军团菌检测抗原均为阴性。 2.2　病毒培养及PCR 检测结果　 急性期患者咽拭子标本30 份,经过病毒培养，20份出现明显的细胞病变，病变阳性率66.7%。进行PCR扩增时，其中22份标本扩增阳性，阳性率为73.3%，同时发现仅Ad3引物的PCR扩增产物均在847 bp附近观察到清晰的DNA条带，其余4对引物均未见DNA条带。 2.3 IgM检测结果 血清标本82份，52份急性期血清，30份未发病战士的对照组血清。52份急性期血清中，仅2份强阳性，1份弱阳性，IgM阳性率为5.8%；而对照组血清均呈阴性反应，两者间差异无统计学意义（Fisher 精确检验 P =0.295）。 2.4 IgG检测结果 血清标本134份，52份急性期血清，52份恢复期血清，30份未发病战士的对照组血清。3种血清IgG抗体阳性率