肠道病毒71型抗原含量检测方法的建立及初步验证.pdf

388 · 中华实验和临床病毒学杂志2009年 l0月第 23卷第5期 ChineseJExpClinVirol，Octomber2009，Vo1．23，No．5 ． 技 术 方 法 ． 肠道病毒 71型抗原含量检测方法的建立 及初步验证 徐静，崔文禹，李树香，刘敬，王欣怡，陈蕾，沈心亮 【摘要】 目的 建立肠道病毒71型(EV71)抗原含量检测方法并进行初步验证，用于疫苗研制及 生产过程中抗原含量的检测。方法 以抗 EV71单克隆抗体为包被抗体 ，酶标抗 EV71多克隆抗体为 检测抗体 ，建立双抗体夹心 ELISA方法 ，以本室 自制 EV71抗原参考品为定量标准 ，建立抗原标准 曲 线 ，确定定量限度及最佳定量范围，并对该方法的准确度 、精密度和特异性进行初步验证。结果 建 立了双抗体夹心检测 EV71抗原含量的ELISA方法 ，定量限度为0．23ktg／ml，最佳定量范围为 7．32～ 0．23ug／ml，相关系数为 R =0．9976；准确性较好 ，回收率在 90％～110％之间；精密性较好 ，变异系数 小于 10％；除与 EV71样品有特异性反应外，与其他样品无交叉反应。结论 建立 了检测 EV71抗原 含量的双抗体夹心ELISA方法并进行了初步验证，为疫苗研制过程中抗原含量测定提供了简便 、快捷 的检测手段 。 【主题词】 肠道病毒属； 酶联免疫吸附测定； 敏感性与特异性 DevelopmentA methodofquantitativeassayforenterovirus71 XU如 ，CUIWen-Yu，LIShu-xiang，LIU 西 ，WANG n-H ，CHEN-Le，SHENXin-Liang．NatioM fVaccineandSerumInstitute100024，China Correspondingauthor：XUJing，Email：巧176@ 163．con A【bstract】 0bjective Toestablishaquantitativeassayforenterovirus71，thiscanbeusedindetecting theviruscontentduringvaccinedevelopmentandproduction．Methods Weestablishedthemethodofquantitative assayofrEV71byusingdoubleantibodysandwichELISA．Thesensitivity，accuracy，precisionandspecificityof themethod were evaluated．Results We developed an ELISA method to quantitative assay ofrEV71．The quantitationlimitofthemethodis0．23btg／mlandthequantitationscopeofthemethodis7．32— 0．23gg／m1．the coefficientcorrelationisR =0．9976；Th emethodshowedgoodaccuracy，precisionandspecificity．Th erecovery iSbetween9O％一 1l0％ and thevaliation coefficientiSlowerthan 10％ ．Conclusion AnEUSA methodwas developedofrthequantitativeassayof EV71virus，whichcanbeusedofrtherapidquantitativedeterminationof EV71virusduringvaccinedevelopmentandproduction． 【Keywords】 Enterovirus； Enzyme—linkedimmunosorbentassay； SensitivityandSpecificity 肠道病毒 71型 (enterovirus71，EV71)是于 1969 要 的作用。目前研究的重点主要集 中于甲醛灭活疫 年首次从加利福尼亚患有 中枢神经系统疾病的婴儿 苗、类病毒颗粒 (vLP)疫苗和 DNA疫苗