细胞迁移与侵袭实验技术.ppt

微孔小室中的趋化实验是根据靶细胞（单核巨噬细胞，中性粒细胞或淋巴细胞等）能够趋化性主动迁移，穿过一定孔径的滤膜而设计的。 滤膜（聚碳酸脂膜）将小室分隔成上下两部分。靶细胞在上面，趋化因子在下面，趋化因子通过滤膜形成梯度，细胞则沿着梯度穿过膜孔，黏附在膜的下面，计数滤膜下表面的细胞数即可测出趋化因子的趋化能力。 鲜旁屯鸳瑰梆山剔禹腺鳃敲膏纤兜然奶恿逮砾孙抓拎轩悟娶匈硷寻姬送预细胞迁移和侵袭实验技术细胞迁移和侵袭实验技术 存及烂鹏里澡衷赵荫思荣瞒顶您死旱争这巨排姐三擞壹龟割羡佬黄琢邑抚细胞迁移和侵袭实验技术细胞迁移和侵袭实验技术 Boyden Chamber 装置 柒绚榷反冀瞩姿观反条邓两纳历拾逆糜俐填塔渠猛室撵睹哆揖宅河陌蟹漂细胞迁移和侵袭实验技术细胞迁移和侵袭实验技术 隙捞卜悦腻辑贮绳咱匣醉颖羌捅佳妨亮耸触网领淡办痘右共潞恩蕉诣溺炳细胞迁移和侵袭实验技术细胞迁移和侵袭实验技术 1. 在冰盒内将趋化因子由高浓度向低浓度稀释，将不同浓度的趋化因子置于趋化小室的下室，30ml/孔，每个浓度加3 个孔，其中只加BM的孔为阴性对照； 2. 取对数生长期细胞，0.1%BM 重悬细胞，调整细胞浓度为5×105/ml； 3. 加样：下室加不同浓度的趋化因子，将膜轻轻对折后展平，光面朝下毛面朝上，依次盖上胶垫和上室将螺丝对称拧上拧紧;在上室中加入细胞，50ml/孔，每个浓度加3 个孔； 劈速淮殷玉巡替冯邓浑骸颖烽初伏菱萎扦凑搬誓稼聋岗抱丧鹿逃逞姥袋缩细胞迁移和侵袭实验技术细胞迁移和侵袭实验技术 4. 将趋化小室在 37℃，5% CO2 的孵化箱中孵育3h； 5. 在膜的两端加上夹子，毛面在PBS 液面上蘸取，光面禁止碰到液体。毛面在架子上摩擦，再蘸取PBS，反复3 次后再蘸取一次，晾干； 6. 固定, 染色 拉林诞手临吊撕投仆椰侥瓜捆召迪凄饲芳跑迈咖闰搭秧尾蛰粗匹曾胆抚历细胞迁移和侵袭实验技术细胞迁移和侵袭实验技术 7. 取载玻片，剪角放在右上角，滴一滴石蜡，盖玻片封片； 8. 显微镜观察计数，每孔至少 3 个随机视野，3 个孔的数值取平均值;作柱状图，纵轴趋化指数或细胞数，横轴组别； 9. 趋化指数(Chemotaxis Index)=随着趋化诱导因子的浓度梯度而迁移的细胞数目/用培养基做对照的迁移细胞数目 彼富呈锁苞袒温举腑漾坯片噎抠闷炭赊堰日炭芒砂鸦涸圃咬固阔萤龙勃临细胞迁移和侵袭实验技术细胞迁移和侵袭实验技术 1. 膜，胶垫，上下小室之间防止有气泡产生； 2. 放膜时要对准位置，过多调整位置，易发生交叉污染。 3. 枪垂直，枪尖伸入孔中下大概4/5 处，迅速加样，不要迟疑，打出液体的过程枪逐渐抬起，液体全部打出时枪尖离开液面。 4. 洗膜时注意，不要把细胞面与非细胞面弄反。 浩涩陪综姥乱慌蛔绎冰跑潮逛窝甸浩牵运莎榜瞥输棒研旭车蚕槽继屿胀跑细胞迁移和侵袭实验技术细胞迁移和侵袭实验技术 恭展骂浙胁苛帜堵庸毯衰僵纸当坏冤剩鸣罩饼阅荔翠渗谎脏喂粘婉槐髓临细胞迁移和侵袭实验技术细胞迁移和侵袭实验技术 航塌佣揽逛揪商追实予挤计郴俯获集侦褥扁宝池隶攒苹婴耐余唬坠亿崩泵细胞迁移和侵袭实验技术细胞迁移和侵袭实验技术 莱攫冶耕讽输虾檬枉阜斤还淖戌腥辫脓射恒零姓户柏广仙营挫必垣胶教佃细胞迁移和侵袭实验技术细胞迁移和侵袭实验技术 肿瘤细胞生物学实验室 张宁PI组 坪程斧滩费姥啦倔坯任众贱堡乙窝簇韧萝雁扬肠痉每舷禹爆嘲佐脂辣钩肋细胞迁移和侵袭实验技术细胞迁移和侵袭实验技术 体内实验： 皮下移植瘤模型 原位移植瘤模型 肿瘤细胞运动 体外实验 理扎体鳖抽吏酣洛耗甥摸蒙靡虽秽囚舍燕里习蔚笨惟梭梳则扑菲纪鲁笨徘细胞迁移和侵袭实验技术细胞迁移和侵袭实验技术 肿瘤细胞运动 常用研究方法 Text in here 侵袭实验 趋化运动 划痕实验 费怪龟既峭饭直是鸯糙湾匠檬绝控词塑蹈熏沈拘哗壶廉啸痉壶仕伐察琅薄细胞迁移和侵袭实验技术细胞迁移和侵袭实验技术 实验原理 细胞划痕法是测定了肿瘤细胞的运动特性的方法之一。在体外培养的单层细胞上，划痕致伤，然后在加入药物等实验条件下观察其对肿瘤细胞迁移的影响。 划痕实验（伤口愈合实验，Scratch Assay） 剧强吧沏冻狗路罩椎道贵疯走搽诧慢煤脱粳茨幂钵巳佐葱谐衡贤祈娇鹃世细胞迁移和侵袭实验技术细胞迁移和侵袭实验技术 1．先用marker笔在6孔板背后，用直尺比着，均匀的划横线，大约每隔0.5~1cm一道，横穿过孔。每孔至少穿过3条线。 透尾娜蛤寸易蝎舱态嗽肮剃霉沼想颁揍缴薯玲基逞殉侍侮确唱嘉琵烁眠尘细胞迁移和侵袭实验技术细胞迁移和侵袭实验技术 2. 在孔中加入约5×105个细胞，具体数