专业论文读书报告.pptx

专业论文读书报告 报告人：程玲慧 江西师范大学生命科学学院 Gene identification and recombinant protein of a lysozyme from freshwater mussel Cristaria plicata 淡水褶纹冠蚌溶菌酶的基因识别和重组蛋白 摘要 溶菌酶是双壳类动物中固有的免疫反应中抗细菌感染的重要蛋白质，并作为消化酵素提供营养。 CpLYZ1 cDNA 序列的全长是 763bp。 CpLYZ1可以被检测到在所有被审查的组织中，但肝胰腺中有最高表达水平。 在嗜水气单胞菌侵染后，血细胞、 肝胰脏和鳃中 CpLYZ1 的表达水平显著增加。血细胞CpLYZ1 表达水平在被感染后的6h~24h又急剧下降,在 48 h大大增加。而在肝胰腺和鳃中达到最高水平分别需24h、48h。 CpLYZ1最适pH值和温度分别为 5.5 和 50℃。 对大肠埃希氏大肠杆菌、 嗜水气单胞菌、 金黄色葡萄球菌、 枯草杆菌、 链球菌 sp和表皮葡萄球菌，重组 CpLYZ1具有溶菌活力。 关键词：淡水褶纹冠蚌 溶菌酶 基因克隆 基因 重组蛋白 一、 引言 溶菌酶是很多种生物无处不在的酶。这种酶可以切断细菌细胞壁的两个氨基糖、 N-乙酰胞壁酸与 N-乙酰氨基葡萄糖之间形成的糖苷键从而导致细胞溶解 溶菌酶的主要生物作用是主体防御，这种酶可以作为抗菌和免疫调节剂。同时，溶菌酶被视为一些动物的重要消化酶，特别是对于过滤器式喂养的有机体 。 在这项研究中主要要了解正常双壳类肝胰脏、鳃、血细胞等组织中cplyz1 mRNA转录调控的表达模式。 二、 材料与方法 实验动物和细菌的挑战 RNA提取和cDNA合成 扩增阳离子和内部CpLYZ1 cDNA片段的克隆 快速扩增cDNA末端（RACE）的阳离子 序列分析 嗜水气单胞菌入侵之后CpLYZ1 mRNA的组织分布和时间表达 重组表达载体的构建 重组CpLYZ1的表达，纯化阳离子和复性 溶菌酶活性测定 重组CpLYZ1的抗菌谱 三、结果 CpLYZ1的cDNA序列 同源性比较，系统发育分析的域结构 CpLYZ mRNA 在不同组织中的分布 嗜水气单胞菌入侵后CpLYZ1 mRNA在血细胞、肝胰脏、鳃中的表达 重组蛋白的表达，纯化和复性 温度和pH对重组cplyz1相关活性的影响 重组cplyz1抗菌谱 讨论 溶菌酶是具有杀菌效果和免疫功能的效应分子。它有三个类型、 c 型、 g 型和 i 型 。 i-型溶菌酶基因表达模式对组织的变化无动于衷可，能表示它们在其进化过程中有不同的生物逻辑函数 Glu35 和 Asp52是必不可少的两个酸性残留物的来保持c 类型溶菌酶活性 。 在研究中，重组 CpLYZ1 显示广泛的对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的抗菌活性。结果表明 CpLYZ1 拥有酶促和非酶抗菌活性。特别是病原体引起的水生动物疾病的水生动物有抗菌活性。我们推测非酶抗菌活性的 CpLYZ1 引起单螺旋肽，及其机制需要进一步清验证阳离子。