猪链球菌2型溶血素基因与38KDa蛋白基因克隆及联合表达.PDF

维普资讯 — WW—W．biomed．net．cn ProgressinModernBi0memcine 2oo7 v．．7 No．7 猪链球菌2型溶血素基因与38KDa蛋白基因克隆及联合表达木 王 华 0 王君玮 陈义平 赵永刚 徐天刚 赵云玲 张 维 王志亮 (1中国动物卫生与流行病学中心ABSL-3实验室 青岛266114；2扬州大学兽医学院 扬州225009) 摘要 目的：研究有效的猪链球茵病疫苗。方法：以四川株猪链球茵2型基因组DNA为模板分别扩增溶血素基 因和38KDa基因 主要功能区基因；并经连接、克隆及酶切鉴定。分别构建原核表达栽体pET32a．Sly、pET32a-38KDa，提取阳性克隆质粒分别进行双 酶切并纯化，通过PCR串联两片断，将 目的片断定向克隆到表达载体pET32a中，经测序正确后，重组质粒转化入大肠杆茵BL21 (DE3)，用IPTG进行诱导表达。结果：重组茵茵体裂解物经SDS电泳可检测到相对分子量约为60Ku的重组蛋白，表达产 物经纯化后。免疫印迹法(Western-blotting) 实该重组蛋白可以与SS2阳性血清发生特异性反应。结论：本研究为重组蛋白的免 疫保护应用奠定基础。 关键词：猪链球茵2型；溶血素；38KDa蛋白；克隆；表达 中图分类号 ：Q813 文献标识码：A 文章编号 ：1673-6273(2007)07-0977-04 CloningandCo．expressionOftheSuilysinGeneand38KDa ProteinGeneOfStreptococcusSuisSerotype2木 WANGHua2WANG。J．n—wei，CHENYi-ping，ZI-IAOyong-gang，XUTian-gang， ZHAO Yun—ling，ZI-IANG W ei，WANG Zhi—liang (1ABSL一3~bomwryofNationaldiagnosticcenterforAnimalSanitationEpizoology．PRC，Qingdao266114； 2CollegeofVeterinaryMedicine,YangzhouUniversity，Yangzhou225009) ABSTRACT0bjective：InordertOdevelopaneffectivevaccine．Methods：accordingtOthepublishedgenesequence，apair ofprimerswasdesignednadsynhtesizedrespectively， emainregionsofhteSuilysin (Sly)genenad38KDagenewereamplified respectivelyfrom geneomicDNA ofStreptococcussuisserotypc2srtainrfom Sichuna province byPCRnadwasclonedrespective-- IyintopMD18-Tvector．AfterpositiveimmunityWasverified，htefragmentsofSlynad38KDagenelinkedbyPeRwerecloned nitopET32aagam tOconstructhteprokaryoticexpressionvectorsofpET32a-Sly．pET32a-38KDa．Theplasmidofpositiveclones Was exrtacted．digestedwidlenzymesnaddetectedrespectivelybyPeR．ThePeR productswerelaterclonednitoplasmidvector pET32aviarestriction endonudease．Aftersequence determinationnadanalysisWas confirmed，hterecombinantplasmidswere tra