细胞色素P450亚酶1A2活性荧光定量检测试剂盒产品说明书.PDFVIP

细胞色素 P450 亚酶 1A2 活性荧光定量检测试剂盒产品说明书 主要用途 细胞色素 P450 亚酶 1A2 活性荧光定量检测试剂是一种旨在通过甲氧基异酚噁唑脱甲基酶反 应系统中甲氧基异酚噁唑转化为羟基异吩噁唑酮后荧光峰值的变化，即采用荧光法来测定样品中酶活性的 权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。其适用于各种细胞或组织裂 解萃取液样品 （动物、人体）或纯化微粒体样品细胞色素 P450 亚酶 1A2 的总活性检测。产品严格无 菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。 技术背景 细胞色素P450亚酶1A2，简称为CYP1A2，是肝细胞微粒体复合功能氧化酶系统的成员之一，也是芳香族碳氢 化合物加羟基酶 （arylhydrocarbonhydrorylase；AHH）的成员之一。在人体肝脏里占P450酶系15％。与 CYP1A1高度同源，特别是在外显子2、4、5和6。CYP1A2 由多个多态性变体，最常见的是：1A和1F，与咖 啡因代谢和迟发性皮肤卟啉症 （porphyriacutaneatarda）相关。CYP1A2 的作用在于体内外源化合物 （xenobiotics），包括药物、致癌剂、化学污染物的氧化代谢，即单加氧化作用 （monooxygenation）和羟化 作用 （hydroxylation）,以及脂类合成包括胆固醇和类固醇。芳香族碳氢化合物诱导CYP1A2 的表达。甲氧基异酚 噁唑脱甲基酶 （7－methoxyresorufin-O-demethylase；MROD）的活性是细胞色素P450亚酶1A2 的诊断标记，其 基于MROD选择性催化细胞色素P450亚酶1A2 的活性。甲氧基异酚噁唑 （7－methoxyresorufin）在甲氧基异酚 噁唑脱甲基酶的催化下，转化为羟基异吩噁唑酮 （resorufin）后荧光峰值的变化 （激发波长530nm， 散发波长590nm），来定量测定细胞色素P450亚酶1A2 的活性。甲氧基异酚噁唑脱甲基酶反应系统为： 产品内容 缓冲液 （ReagentA） 毫升 反应液 （ReagentB） 毫升 底物液 （Reagent C） 微升 标准液 （ReagentD） 微升 产品说明书 1份 保存方式 保存在－20℃冰箱里，底物液 （Reagent C）和 标准液 （ReagentD）避免光照，有 效保证 6 月 用户自备 1.5毫升离心管：用于标准样品操作的容器 恒温水槽：用于孵育反应比色皿或酶标 板：用于反应和比色的容器 荧光分光光度仪或酶标仪：用于荧光分析 实验步骤 实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂置入冰槽里融化。然后进行下列操作。 一、 测定准备 1．准备好待测样品 （例如细胞裂解萃取液或微粒体样品等），置于冰槽里 2．设定好荧光分光光度仪 （温度为37℃）：激发波长530nm，散发波长590nm，并置零 3．准备好5个1.5毫升离心管，标记为1至5 号 管4．加入xx 微升缓冲液 （ReagentA）到1号 5 xx ReagentA 2 管 ．分别加入 微升缓冲液 （ ）到 至5 号管 6．移取xx 微升标准液 （Reagent D）到1号管，混匀 7 xx 1 Reagent D 2 ．小心移取 微升 号管稀释的标准液 （ ）到 号 管，混匀8．小心移取xx 微升2 号管稀释的标准液 （ReagentD） 到 3 号管，混匀 9． 小心移取 xx 微升 3 号管稀释的 标准液 Reagent D 4 10 1 5 （ ）到 号管，混匀 ．将 至 号管放进冰槽里备 用，避免光照；标准管浓度见下表 管号 缓冲液 （ReagentA） 标准液 （ReagentD） 标准羟基异吩噁唑酮浓度