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細胞融合與單株抗體 Cell Fusion and Monoclonal Antibodies 國立台灣大學 生化科技學系 生化研究室 莊榮輝 基礎免疫學： A) 脊椎動物體內有催毀外來入侵物體的免疫系統： 免疫反應可分成先天及後天兩大系統，又各有兩種方式，分別以細胞或分子去掃除入侵物。 當入侵物太多時，即由先天免疫系統誘發後天免疫，開啟了更有效率、更為強大的防禦機制。 兩大系統 先天免疫系統 後天免疫系統 兩種方式 細 胞 巨噬細胞 (Macrophage, m?) ★ 自然殺手細胞 (Natural killer cell, NK) T細胞 TK, TS, TH B細胞 分 子 干擾素 (Interferon) 溶菌 (Lysozyme) 抗體 (Antibody, Ab) 擬人對比→ 警察系統 (調查局) 軍事系統 干擾素： 遭病毒攻擊的細胞會放出干擾素，干擾素會活化免疫系統。 溶菌： 在體表及淚液中溶解細菌細胞壁。 巨噬細胞： 最基層的免疫細胞，是免疫系統的第一線防禦。 自然殺手細胞： 可清除體內的癌細胞，是免疫監視系統。 B) 後天免疫反應的四個階段： 遭遇： 巨噬細胞把抗原分解成小片段，專一地表現給TH細胞。 動員： TH細胞動員TK細胞及B細胞，後者生產專一性抗體。 掃蕩： 抗體及TK細胞攻擊入侵的抗原。 休止： 完成清除抗原後，免疫細胞休息。 C) 後天免疫反應的兩大特點： 專一性： 由 甲抗原 所誘導的免疫反應只對 甲抗原 有效。 記憶性： 痊瘉後若 甲抗原 再度入侵，可迅速動員掃蕩之。 D) 抗體是由B細胞所分泌的蛋白質： 抗體分子： 由四條蛋白質長短鍊所組成 (兩重兩輕)。 結 合 區： 抗體分子上有兩個抗原結合區 (二者相同)。 專 一 性： 抗體與抗原結合極具 專一性 (如lock key般吻合)。 抗體種類： IgG是單一抗體分子，另有IgM (五元體) 及IgA (二元體)。 為何要使用單株抗體： 1) 抗原分子上可以誘導出抗體的部位或片段，特稱之為 抗原決定基 (antigenic determinant)；一個抗原分子上通常都有許多處抗原決定基，而每個決定基至少都可誘生出一種抗體；因此在傳統抗血清中，都含有許多種不同的抗體，分別對抗這些不同的決定基。 2) 對於分子構造相似的抗原，由於它們含有共同或相似的抗原決定基，所產生的抗血清對這兩種相似的抗原都會產生反應；因此在檢定此類抗原時，其 專一性 不很理想，常常會出現假陽性，也稱為 交叉反應性。 同時又由於免疫動物的個別體質不同，對抗原的反應也有相當的差異，以致無法準確控制所得到每批抗血清 效價 的高低。 3) 血清中的每一種抗體是由單一個B細胞所分泌產生，若能把此B細胞由脾臟中挑出來，單獨培養成細胞株，則可得單一種類的抗體，只會對一種 抗原決定基 反應，其專一性極高。 大量培養此細胞株，即可有品質一定、純度均一的抗體，此即為 單株抗體。 4) 然而B細胞不易在培養基中生長，雖然有人一直努力，想找出在體外培養脾臟細胞的條件，但結果均不甚理想，因此上述想法不易達成。 5) 癌細胞的生長不受控制，很容易在培養基中生長，有很多已經建立好的癌細胞株，其生長特性均已了解； 若把癌細胞永續生長的特性，利用細胞融合法導入可生產有用抗體的B細胞中，則得到可在培養基中永久生長的B細胞株，此即 融合瘤 細胞株。 6) 廣義來說，細胞融合也可說是 基因重組 的一種，它是以融合兩種不同遺傳特性的細胞，來達成改變遺傳形質的目的。 另外，微生物或植物的細胞，亦可以 原生質體 的形式互相融合，以改變其遺傳性質。 細胞融合法： 實際操作流程請參考 水稻蔗糖合成之研究 莊榮輝博士論文 p.88-105 利用polyethylene glycol (PEG) 進行小白鼠 脾臟細胞 與 骨髓癌細胞 融合，經過 篩選 及 單株化 後，可得到分泌有單株抗体的融合瘤細胞。 A) 小白鼠免疫及脾臟細胞： 小白鼠 (BALB/c) 先以目標抗原 (如菌體) 免疫，抗原需加 佐劑 (adjuvant) 製成乳劑，打入小鼠體內慢慢釋出，誘使B細胞成熟增殖並生產抗體，然後取出脾細胞 (大多為B細胞) 與骨髓癌細胞進行細胞融合。近來有人直接取出健康的脾細胞，在試管中加入抗原進行體外免疫；或打開腹腔直接在脾臟注射抗原免疫。 但除非抗原來源困難或有其它目的，一般仍採行舊法，因免疫反應的啟動機制非常複雜，不單是靠脾臟而已。 B) 骨髓癌細胞 (NS-1)： NS-1是穩定的小白鼠BALB/c癌細胞株，除了能在培養基中永續生長外，尚有一重要特性，其細胞缺乏兩種核酸代謝的重要酵素 (TK, thymidine kinase及HGPRT, hypoxanthine