甲状腺癌功能性mirna的鉴定临床意义及其作用机制开题报告人.docVIP

甲状腺癌功能性miRNA的鉴定、临床意义及其作用机制 开题报告人:王培松 指导教师:陈光教授 报告内容 1.背景及选题依据 2.研究目的及意义 3.研究内容及关键问题 4.研究方法 5.研究条件 6.研究进度及具体安排 7.本题创新之处 8.预期结果 背景及选题依据 甲状腺癌发病占甲状腺结节的5-20%、全身肿瘤的1.5%，是内分泌系统最常见的恶性肿瘤。近年许多资料显示甲状腺癌的发病率逐年上升, 是近年备受关注的肿瘤之一, 也是内分泌系统肿瘤领域的研究热点。2008年估计美国新发病例37 340 , 1590人死于甲状腺癌。由于甲状腺癌多起病隐匿,常以无痛性甲状腺结节为最初临床表现,因此早期诊断较为困难。目前常用诊断方法包括触诊、超声、核素显像、细针穿刺细胞学活检等,其中细针穿刺细胞学活检是筛查和早期诊断甲状腺癌的有效方法,但仍然存在一定的假阴性率和部分无法确诊的病例,且需考虑患者的依从性。因此，研究鉴定早期诊断预警分子，是目前甲状腺癌临床研究所面临的瓶颈问题，有重要临床意义。 越来越多的实验数据逐步建立了肿瘤与miRNA表达变化的关联，提示我们在不同的肿瘤中检测特定的miRNA的表达变化很可能成为肿瘤诊断、分期和预后预测的有力工具。但甲状腺癌中的miRNA尚知之甚少。 研究目的及意义 通过检测甲状腺良恶性肿瘤及其配对血清中miRNA的差异表达情况，分析与患者临床病理特征及其生存情况的相关性，鉴定出与甲状腺癌发生发展，特别是早期癌变密切相关的功能性miRNA。为通过检测新型miRNA开展甲状腺癌早期诊断及预后分级提供新途径。 研究内容及关键问题 1、研究候选miRNA在甲状腺癌中的表达特征与甲状腺癌发生发展的相关性。采用定量RT-PCR检测3-5个候选miRNA在30例甲状腺癌组织及癌旁正常甲状腺组织样本及30例良性甲状腺疾病组织中的表达；分析这些miRNA与甲状腺癌患者临床病理特征及其生存情况的相关性；在此基础上，从中筛选出1-3个具有重要临床意义的miRNA。 2、检测不同临床分期，特别是早期甲状腺癌患者血清中的上述miRNA的表达变化规律，分析将这些miRNA作为甲状腺癌早期诊断预警分子的精准性。 3、通过检测同一患者多发灶同一miRNA的表达，探讨其多灶性起源的原因。 4、研究揭示具有重要临床意义的miRNA在甲状腺癌发生发展，特别是在早期癌变中的功能及其作用机制，为通过检测新型miRNA开展甲状腺癌早期诊断及预后分析提供新途径。通过BrdU和克隆形成等实验确定miRNA是否与甲状腺癌细胞的分裂增殖密切相关；通过细胞移动和细胞侵袭等实验确定候选miRNA是否在甲状腺癌细胞的侵袭和转移中发挥作用；最后通过定量RT-PCR和免疫印迹（western blot）等技术手段，确定miRNA所调控的靶基因，确定作用机制。从甲状腺癌差异表达miRNA中，筛选出有重要临床意义者，进一步应用过表达与RNA抑制技术，开展miRNA功能研究，鉴定出功能性miRNA，是本项目的技术关键。为此，我们拟选取至少3种甲状腺癌细胞（ATC cell lines ARO、 FRO、 KTC-2 (derived from anaplastic transformed PTC); PTC cell linesNPA、 TPC-1;) FTC cell line WRO）和3种永生化正常甲状腺滤泡细胞(如HT-ori3、HEK293T等)，分别进行miRNA过表达或miRNA抑制实验，从正反多方面进行研究，可确保实验结果确切，说明问题有力。 技术路线 研究进度及具体安排 2010年2月至2010年7月，临床标本资料收集整理。 2010年7月至2010年10月定量RT-PCR检测候选miRNA在30例甲状腺癌组织及癌旁正常组织样本及30例良性疾病组织（每份组织均有其术前血清）中的表达量，并分析它们的表达与患者的临床病理特征及其生存情况的相关性，筛选出1-3个具有潜在临床意义的miRNA。 2010年10月至2010年12月，鉴定具有潜在临床意义的miRNA（1-3个）在甲状腺癌发生发展中的功能及其作用机制。 在课题实施过程中，根据课题进展情况，随时总结实验结果，撰写研究论文。 研究条件 吉林大学第一医院甲状腺外科每年可完成数百例（400例以上）甲状腺癌切除手术，本试实验新鲜标本来源充足 吉林大学第一医院病历资料系统 吉林大学第一医院病理资料库 吉林大学白求恩基础医学部生化实验室 吉林大学第一医院病理科高年资医师阅片 本题创新之处及成果价值 1.发现某种新型的miRNA类甲状腺癌早期诊断预警分子。研究鉴定早期诊断预警分子，对甲状腺癌早期诊断有重要临床意义。针对这一突出临床问题，本研究拟通过检测甲状腺良恶性肿瘤及其配对血清中miRNA的差