综述氰化物诱导初级皮层细胞凋亡的研究进展.doc

综述：氰化物诱导细胞凋亡的研究进展 蒋毅弘 孙力菁 摘要：氰化物是一种神经毒素，能抑制细胞色素氧化酶的活性而中断电子传递链、阻止ATP生成，造成组织中毒性缺氧。同时，它的毒性能诱导多种组织细胞凋亡，尤其中枢神经系统皮层和中脑细胞发生明显的凋亡。氰化物可通过氧化应激诱导DNA广泛片段化和损伤线粒体机能，进而导致细胞凋亡。在凋亡过程中，氰化物激活细胞内各类信号转导因子，如NF-kB、p38MAP激酶活化可影响bcl-2蛋白家族的基因表达，启动凋亡瀑布反应通路。 关键词：氰化物 线粒体途径 细胞凋亡 bcl-2蛋白家族 ROS氧化应激　 众所周知，氰化物（Cyanide）是一种神经毒素，可引起组织中毒性缺氧。进入机体内氰化物可分解氰根离子（CN-），氰根离子能迅速与线粒体内氧化型细胞色素氧化酶中的三价铁结合，阻止其还原成二价铁，使传递电子的氧化还原过程解偶联，造成组织细胞利用缺氧障碍和ATP生成受阻[]。但是，近年来人们发现氰化物可以诱导离体培养的小鼠皮层、中脑细胞发生明显的细胞凋亡[]。这表明氰化物对组织细胞的生物学效应可能存在其他的作用途径。本文对线粒体凋亡途径和氰化物诱导线粒体凋亡机制的研究进行总结和综述。 氰化物结构与分布 氰化物是指含有氰基（CN）的化合物，其中的碳原子和氮原子通过三价相连。这三价结合使得氰基具有相当高的稳定性，在通常的化学反应中以一个整体存在。因该基团具有和卤素类似的化学性质，常被称为拟卤素[]。 氰化物可分为无机氰化物和有机氰化物。无机氰化物俗称山奈（来自英语音译“Cyanide”），是指包含有氰根离子（CN-）的无机盐，常见的有氢氰酸（HCN）、氰化钾（KCN）和氰化钠（NaCN）。有机氰化物是由氰基通过单键与另外的碳原子结合而成。依据其结合的方式不同，有机氰化物可分类为腈（C-CN）和异腈（C-NC），其氰基也可分为腈基（-CN）或异腈基（-NC）。有机氰化物如乙腈、丙烯腈、正丁腈、碳酰氰基-对-氯苯腙（carbonyl cyanide m-chlorophenylhydrazone，CCCP）和arbonyl cyanide p-(trifluoromethoxy)phenylhydrazone (FCCP)等，在体内很快析出氰基离子，均属高毒类[]。 在蔷薇科植物：杏、山杏、桃、山桃及李子的种子中存在一种芳香族氰甙,又称之苦杏仁甙，其结构式为苯羟基乙氰-β- D - 葡萄糖- 6 - β- D -葡萄糖甙。它在苦杏仁酶及樱叶酶等葡萄糖甙酶水解生成野樱皮甙和杏仁氰, 后者不稳定,遇热易分解生成苯甲醛和氢氰酸[ ]。在植物种子中，苦杏仁中氰化物的含量最高，因此，苦杏仁作为一种中药，曾发现在癌症治疗中可能存在着药用价值，但其抗肿瘤的疗效国内外说法不一[]。 氰化物诱发细胞凋亡 氰化物诱导细胞凋亡的研究一直受到人们的重视。早在1999年，Mills 等人用6 mg/kg KCN剂量给小鼠腹腔连续注射3天后，发现小鼠脑皮质区神经细胞可以检测到DNA片段化和具有凋亡特征细胞[]。随后，Yan Shou等人用离体的小鼠初级脑皮层细胞进行氰化物促细胞凋亡研究，当100～300(M KCN处理脑皮层细胞24h后发现细胞出现凋亡，认为ROS （reactive oxygen species）在氰化物诱导细胞凋亡过程中发挥了重要作用[]。同样，用400 μM KCN处理中脑神经母细胞瘤（MES 23.6）24小时后，细胞凋亡明显增加，凋亡率达17%（对照组细胞2.5%）[ ]。近来，人们通过有机氰化物对组织细胞的毒性研究证实，呼吸链的解偶联剂CCCP可以使多种不同细胞系发生凋亡，如Jurkatneo、FL5.12、HL-60和ST486 细胞。例如，Hand等人用呼吸链解偶联剂FCCP 20(M浓度加入离体培养的腺癌细胞（Calu-6）72 小时后，细胞出现凋亡[]。Chaudhari等人证实CCCP可以通过阻断呼吸链和ATP产生途径诱导SNU-638细胞（人胃癌细胞）凋亡[]。但也有报道认为，氰化物并不能使细胞发生明显的凋亡。我们研究结果发现，用KCN处理神经母细胞瘤（IGP-N-91）24h后细胞凋亡出现增多，但致死量KCN处理U937细胞24h、48h后，细胞的增殖周期和Annexin-V值与对照组无明显的差异。这实验结果清楚地提示氰化物不能诱导U937细胞发生凋亡。因此，关于氰化物是否能诱导非神经细胞发生凋亡？目前说法不一，到目前为此，仍不清楚[6-]。 凋亡通路 氰化物诱导细胞凋亡的通路途径研究主要集中在神经细胞。 1细胞色素C释放 线粒体是细胞生命活动的控制中心，它不仅是细胞氧化磷酸化和呼吸链反应的重要场所，而且也是细胞凋亡的调控中心。线粒体损伤是诱发细胞凋亡的重要途径之一。有学者认为氰化物可以通