生化试验课-谢珍玉-海南大学.ppt

海南大学公共实验中心教案 生物化学实验 生物化学实验 海南大学海洋学院水产学系 实验室规则(一) １、自觉遵守学习纪律，保持实验室肃静，不得喧哗吵闹、迟到早退，更不得缺席。 ２、爱护仪器，厉行节约。试剂、药品、蒸馏水等应节约使用，不得浪费。如不慎损坏仪器，应及时报告老师，说明原因，经老师同意后，方可换领。并应按规定赔偿或处理。贵重、精密仪器，应先熟悉使用方法，在老师的指导下，严格按操作规程操作，发现故障，应立即报告老师，不得擅自处理。 实验室规则（二） ３、取用试剂时，应仔细辨明标签，以免取错。取完试剂后，应及时将瓶盖盖好，放回原处，切忌乱拿乱放，“张冠李戴”。 ４、注意安全，用吸量管吸取试剂时应使用吸球，严禁用嘴吸取。对于有毒、腐蚀的试剂更应注意，应避免其直接接触人体及衣物。乙醚、丙酮等易燃试剂应远离火源，以免发生意外。 实验室规则（三） ５、注意实验室卫生、整洁。废弃液体应倒入水槽，放水冲走，实验用过的和棉花、废纸、沉淀废渣及其他废弃物品等均应放入指定容器，不得随意乱扔或丢进水槽。实验结束后应将实验台整理好。并清扫、整理实验室。关好水、电、门、窗，经老师检查同意后，方可离开实验室。 实　验　目　录 实验参考书 生物化学实验，陶均辉等编，科学出版社，第三版； 基础生物化学实验，王秀奇等编，高等教育出版社，第二版； 动物生物化学实验指导，周顺伍主编，中国农业出版社，第二版。 实验一　 糖的颜色反应 实验试剂： Molish（莫氏）试剂：取5g α-萘酚用95%乙醇溶解至100mL，临用前配制，棕色瓶保存； Sediwanoff（塞氏）试剂：0.5g 间苯二酚溶于1升盐酸（H2O∶HCl=2∶1）(V/V)中，临用前配制； 杜氏试剂：称取2g间苯三酚，溶于250mL95%乙醇中。临用时取此液3mL，缓缓加入15mL浓盐酸及9mL蒸馏水，临用时配制。 实验步骤： 塞氏反应(按下表加试剂) 杜氏反应(按下表加入试剂)  思考题 莫氏反应中莫氏试剂为什么要直接加入溶液中，不能滴在试管壁上? 加浓硫酸时，试管倾斜，硫酸缓缓加入，为什么不能振动溶液？ 实验二　氨基酸的纸层析 重点与难点：氨基酸纸层析的基本原理的理解是本实验的难点。重点是掌握氨基酸纸层析的操作方法和运用。 实验安排：4课时，每人独立实验，4人一个层析缸。 实验原理 纸作支持物，特点是-OH多，亲水性强。 溶剂系统分成两相：固定相（水）特点是易与-OH结合移动慢。移动相（水饱和的有机溶剂）特点是移动速度快。 不同的氨基酸在不同的相中溶解度不同，不同的氨基酸在不同的相中移动速度不同，不同的氨基酸在相同的相中移动速度也不同。 基于以上三点原因，经过层析后，不同的氨基酸移动的距离不同，从而得到分离。分离度用Rf值表示如下： Rf=原点到层析点中心的距离/ 原点到溶剂前沿 的距离 试剂与器材：氨基酸液（5种）、正丁醇、冰醋酸、水、茚三酮、层析滤纸、层析缸、吹风机、喷瓶、铅笔、直尺、分液漏斗 实验步骤 实验准备 点样 展层 显色 记录 计算Rf 值 结论 实验准备 层析液配制: 正丁醇:冰醋酸:水= 5:3:2 (体积比)置分液漏斗中静置分层，取上清液约60ml 倒于层析缸中静置到液面不动为止。 滤纸准备：取层析滤纸，裁成10×15cm的长方形，在距纸一端1.5cm处用铅笔画一直线。在线的两端距边沿1cm处各划一点。在这两点之间均匀的画上四点。在这六点处标上序号1、2、3、4、5、6。 点样: 用毛细管分别吸取各种样液，分别在各原点点上一种氨基酸。注意每一管要分次点完。样点直径小于0.3cm。 显色： 喷瓶将茚三酮溶液均匀的喷在滤纸上。在约105℃的条件下烘烤至各层析斑点显色为止。 结论： 提示通过主要比较Rf值的差异，讨论在该条件下各种氨基酸分离度的大小。 实验三　血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳 重点与难点： 　　　电泳的基本原理，醋酸薄膜电泳的操作。 实验安排：2课时，6-8人一个电泳槽，每人独立实验。 实验原理： 带电颗粒在电场的作用下，移动速度计算如下： 据此公式，在同一电场强度和缓冲液条件下，带电的各种蛋白质成分，移动的速度决定于各蛋白质的带电量和自身分子的大小。 主要仪器 实验步骤： 准备和点样 取一条大小为2cm×8cm的醋酸纤维薄膜（可根据需要选择薄膜的大小），浸入缓冲液中，完全浸透后，用镊子轻轻取出，将薄膜无光泽的一面向上，平放在干净滤纸上，薄膜再放一张干净滤纸，吸取多余的缓冲液。 用玻棒蘸去少量血清，将此血清均匀地涂在载玻片的一端截面上（玻片宽度应小于薄膜），然后轻轻与距纤维薄膜一端1.5cm处接触，