高碘酸氧化 还原胺化法对尿酸酶的聚乙二醇化研究 - 《中国药科大学 .pdf

学 报 ３６４ ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　２０１５，４６（３）：３６４－３７０ 高碘酸氧化还原胺化法对尿酸酶的聚乙二醇化研究 １，２ １ １ ２ 陈阳建 ，陈新齐 ，郑祥云 ，宋潇达 １ ２ （浙江医药高等专科学校生物与制药学院，宁波３１５１００；中国药科大学生命科学与技术学院，南京２１０００９） 摘　要　采用高碘酸氧化还原胺化法对尿酸酶的Ｎ端氨基进行聚乙二醇修饰研究。首先，以相对分子质量为２０ｋＤ 的单甲氧基聚乙二醇氨基盐酸盐（ｍＰＥＧ ＮＨ·ＨＣｌ）和Ｎ叔丁氧羰基Ｌ丝氨酸（ＢｏｃＳｅｒＯＨ）为原料通过酰胺化反应制 ２００００ ２ 备聚乙二醇中间体，然后由三氟乙酸（ＴＦＡ）作用脱去Ｂｏｃ基团获得目标产物ＳｅｒｍＰＥＧ ，该化合物经高碘酸钠氧化生成 ２００００ 具有较高活性的聚乙二醇醛类衍生物，经超滤处理后即可用于蛋白质Ｎ端氨基的定点修饰，并对其修饰尿酸酶的条件进行 １ 了优化。聚乙二醇中间体和目标产物的结构通过ＩＲ和 ＨＮＭＲ进行表征，目标产物的总收率达７２８％。对尿酸酶的初步 修饰研究表明，化合物ＳｅｒｍＰＥＧ 具有较好的修饰蛋白的能力，对尿酸酶的最佳修饰条件为：ＳｅｒｍＰＥＧ 与尿酸酶物质 ２００００ ２００００ 的量比为２∶１，在溶液ｐＨ５０条件下，于２５℃反应６ｈ。 关键词　聚乙二醇衍生物；Ｎ端定点修饰；尿酸酶；高碘酸氧化；还原胺化 中图分类号　Ｏ６３３１；Ｑ５５４　　文献标志码　Ａ　　文章编号　１０００－５０４８（２０１５）０３－０３６４－０７ ｄｏｉ：１０．１１６６５／ｊ．ｉｓｓｎ．１０００－５０４８ ＲｅｓｅａｒｃｈｏｎＰＥＧｙｌａｔｅｄｕｒｉｃａｓｅｂｙｐｅｒｉｏｄａｔｅｏｘｉｄａｔｉｏｎａｎｄｒｅｄｕｃｔｉｖｅ ａｍｉｎａｔｉｏｎ １牞２ １ １ ２ ＣＨＥＮＹａｎｇｊｉａｎ 牞ＣＨＥＮＸｉｎｑｉ牞ＺＨＥＮＧＸｉａｎｇｙｕｎ牞ＳＯＮＧＸｉａｏｄａ １ＳｃｈｏｏｌｏｆＢｉｏｌｏｇｙａｎｄＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ牞ＺｈｅｊｉａｎｇＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅ牞Ｎｉｎｇｂｏ３１５１００牷 ２ＳｃｈｏｏｌｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ牞ＣｈｉｎａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ牞Ｎａｎｊｉｎｇ２１０００９牞Ｃｈｉｎａ Ａｂｓｔｒａｃｔ　　ＰＥＧｙｌａｔｅｄｕｒｉｃａｓｅｗａｓｐｒｅｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅＮｔｅｒｍｉｎａｌａｍｉｎｏｓｉｔｅｓｐｅｃｉｆｉｃｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｂｙｐｅｒｉｏｄａｔｅ ｏｘｉｄａｔｉｏｎｆｏｌｌｏｗｅｄｂｙｒｅｄｕｃｔｉｖｅａｍｉｎａｔｉｏｎＡｍｏｎｏｍｅｔｈｏｘｙｐｏｌｙ牗ｅｔｈｙｌｅｎｅｇｌｙｃｏｌ牘ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅｗａｓｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｄｂｙ ａｍｉｄａｔｉｏｎｆｒｏｍｍｏｎｏｍｅｔｈｏｘｙｐｏｌｙ牗ｅｔｈｙｌｅｎｅｇｌｙｃｏｌ牘ａｍｉｎｅｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ２００００牗ｍＰＥＧ ＮＨ爛ＨＣｌ牘ｗｉｔｈｔｈｅ