第八章吸光度分光光度法.ppt

第八章 吸光光度法; 因为电子能级间的能量差一般为1-20eV (1eV=1.6×10－19J)，而振动能级间的能量差仅为0.05-1eV，至于转动能级间的能量差就更小了(小于0.05eV)。所以 ，在电子能级跃迁(Transition)的同时，必然伴随着振动能级和转动能级的跃迁。因此，分子的电子光谱通常呈带状，称为带状光谱(Band spectra)。显然，分子的带状光谱要比原子的线状光谱(Line spectrum)复杂得多。;V0′;A: pure rotational changes (far infrared) ;表8-1 物质的光和吸收光颜色的关系; 值得注意的是，科学实验证明：不仅赤橙黄绿青蓝紫七种单色光可以混合成白光，也可以把两种适当的单色光按一定比例混合成白光。两种能混合成白光的单色光称为互补色光。;四、光吸收曲线; 由图可见，KMnO4溶液对波长525 nm 附近的黄绿色光的吸收最强，而对紫色和红色光的吸收很弱。;Io = Ia + It + Ir; 溶液对光的吸收程度叫吸光度(Absorbance)。其数学定义为：; 到了1852年，比尔(Beer) 和白那德(Bernard)又分别各自提出：; 朗伯-比尔定律是吸光光度法最基本的定律，是进行定量分析的理论基础。但此定律只适用于单色光。; 从意义上讲， ε是当b =1 cm， c= 1 mol/L时的A ，但实际并不能直接取1 mol/L这样高浓度的有色溶液去测量其摩尔吸光系数，而只能通过计算而得。; 用眼睛比较溶液颜色深浅以确定物质含量的方法称为目视比色法。; 目视比色法的原理可以近似地用朗伯-比尔定律推导如下：;; 2、比色管中的液层较厚，故测定的灵敏度叫高，适宜于稀溶液中微量物质的测定。; 光电比色法的基本原理是利用光电效应测量光线通过有色溶液后的透射光强度，从而求出有色物质对光的吸收程度，进而求出物质的含量。; 注意：光电比色法和目视比色法在原理上并不完全相同。光电比色法是比较有色溶液对某一波长光的吸收情况；目视比色法则是比较透过光的强度。; 3、当有干扰物质共存时，可采用适当的滤光片或适当的参比溶液来消除干扰，因而提高了选择性。;一、分光光度法的特点;二、分光光度计(Spectrophotometer)简介; 光度分析法的误差来源于两个方面，一方面是各种化学??素所引入的误差，另一方面是仪器精度不够，测量不准引入的误差。; 通常，对一台给定的光度计来说，透光度的读数误差△T是一个常数，约为0.01~0.02。精度高的极其可达到0.001。; 从右图可以看出：同样大小的△T在不同的透光度时，所引起的浓度误差△C（或△ A）是不同的。 ; 由此可见，只有在适中的T值时，才可使; 从上面的表和图可以看出，透光度T在15%~65% (A=0.8~0.2)范围内，浓度的相对误差较小，其极小值为：;令;2﹡、有色溶液偏离朗伯-比尔定律所引起的误差;ⅱ “吸收最大，干扰最小”的原则; (2)控制适当的吸光度范围（0.2~0.8);1、工作曲线(Calibration curve)法;2、比较法