动物石蜡切片.PDF

動物石蠟切片 【概說】 動物石蠟切片係將動物材料切塊成適當的大小，滲入石蠟以支持組織，然後用轉動式切片機 (Rotary microtome) 以切片鋼刀或拋棄式切片刀切成適當厚度的切片。 【材料】 (1) 材料準備：針、單面刀片、台木、壓舌板、載玻片、紗布、無塵紙、40C溫板、 40C恆溫箱、 圭筆、黑紙、切片刀、載玻片、標籤及鉛筆。 【步驟】 (1)玻片前處理： →載玻片先浸泡於70%或 90% alcohol中備用 →使用時以紗布擦拭置於約40C溫板上烤乾 →塗上蛋白膠再置於約40C溫板上略烤乾備用 (2)轉動式切片機切片： →將貼附材料蠟塊的小木塊置於樣品座上 →將切片刀片或切片鋼刀架於刀座上(一般調整刀片角度約為4-6) →依轉動式切片機使用方式切片成8-10 m厚度之薄片 →依轉動式切片機使用方式切片成8-10 m厚度之薄片 (3)張貼切片： →於黑紙上選取切好的連續蠟帶 →以刀片切割成比蓋玻片長度稍短的連續蠟帶 →將切割好的連續蠟帶置於組織漂浮槽(Tissue floating bath)中，待展開後以塗有蛋白膠的載玻片 貼附之，再移到溫板上待略乾 →再放入40-45C之烘箱內烘乾約一至二天 骨切片之製作 Bone Section 【概說】 骨頭本性堅硬，若欲以切片機切片則需先去除石灰質，即脫鈣 (decalcification) ，其中最常用 的方法為酸處理法，步驟較為繁瑣且費時。此外，也可以利用磨刀石製成骨薄片，是為製作骨切片標 本最簡便的方法，但較費力。 【材料】 (1) 材料準備：單面刀片、線鋸、磨刀石、大盆子、圭筆、固定瓶、吸管、載玻片、蓋玻片、顯微鏡 、小培養皿、解剖針、濾紙、40C恆溫箱、封片用紙板、藥品及容器、標籤及鉛筆。 (2)藥品準備： 10%福馬林、 50% Alcohol 、75% Alcohol 、85% Alcohol 、95% Alcohol 、100% Alcohol 、Xylene 、Hematoxylin 、Eosin 、Dist. Water 、0.5% HCl acid H2O 、 Permount mounting medium 。 【步驟】 (1)取材與固定： →利用刀片等工具刮除骨肉 →以薄刀口之鋸子切骨頭成小片硬骨約( 2-5 mm ，較軟之骨約4-6 mm) →將骨頭片置於粗面磨刀石上磨至約1 mm厚 →置入裝有10%福馬林之固定瓶中固定約 4-24小時 →以水徹底沖洗去除固定液 →將置骨頭片於細面磨刀石上磨至透明 →使用規筆清掃水中之骨頭片以去除卡在細胞間的砂石 →置入70% 乙醇中保存 (2)染色及封片：使用一般常用之 Hematoxylin與Eosin染色法 → 50% Alcohol………………1-2 mins → Dist. H2O………………….1-2 mins → Hematoxylin…………...…1-6 mins ☻ → Water……………………...10-20 mins → 0.5% HCl acid H2O…...…..few secs ☺ → Water…………………...…2-3 mins (wash) →鏡檢：過染則回 ☺；染色不足則回☻ → Eosin………………………30 secs-3 mins ☻ → Water……………………...10-20 mins → 0.5% HCl acid H2O…...…..few secs ☺ → Water…………………...…2-3 mins (wash) →鏡檢：過染則回 ☺；染色不足則回☻ →70% Alcohol……………few secs → 85% Alcohol………….…...1-2 mins → 95% Alcohol…...………….1-2 mins → 100% Alcohol…...………...3-5 mins → 100% Alcohol…...………...3-5 mins → Xylene…...…