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9分子蒸馏

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 第一节 电泳的理论基础 1.1 电泳 定义:电泳是荷电溶质在电场作用下发生定向泳动的现象。 由于各种物质所带电荷的数量不同,因而,在电场中运动的速度也不一样。电泳法就是利用这种运动速度的差异来进行分离、纯化各种物质的方法。 电泳分离主要有区带电泳、等电点电泳、等速电泳等。这些电泳法又根据是否使用凝胶载体分为凝胶电泳和自由流电泳。 影响迁移率的因素:分子量、所带电量、溶液粘度、温度、pH值、电渗及离子强度等多种因素的影响。一般最合适的离子强度在0.02-0.20mol/L之间。离子强度过小会降低溶质的溶解度,离子强度过大会降低被分离组分的泳动速度并增加电泳过程中的发热量,使区带扩散变形。 聚丙烯酰胺凝胶浓度与电泳迁移率的对数之间呈线性关系,lgu=lgu0-KrTg,可预测根据蛋白质的荷电性质以及分子大小和形状等产生的凝胶分子筛效应进行电泳分离的特性。back 第二节 电泳的类型及其原理 2.1 凝胶电泳 凝胶电泳利用凝胶的分子筛作用使分子大小不同的电解质得到分离:相对分子质量大的溶质受到凝胶阻滞作用大,泳动速度较慢,而小分子溶质泳动速度较快。经过一定时间的电泳后,根据溶质相对分子质量的不同,凝胶中形成数条含有不同溶质的区带,实现溶质之间的相互分离。 2.2 不连续凝胶电泳 最基本的凝胶电泳的凝胶柱中凝胶浓度和pH值均一,为了提高凝胶电泳的分离性能,人们开发了不连续凝胶电泳法。 阴极缓冲液 料液凝胶层 浓缩胶层 分离胶层 不连续凝胶电泳 阳极缓冲液 不连续凝胶电泳的凝胶层由浓度不同的两层凝胶组成。上层凝胶浓度较低,孔径较大,对溶质的泳动无阻滞作用,溶质在此层得到浓缩; 下层凝胶浓度较高,各组分根据荷电量和迁移率的差别得到分离。因此,上层凝胶称为浓缩层,下层凝胶称为分离层,在上层凝胶中溶质以等速电泳的形式泳动,得到浓缩。 分离特性 利用不连续电泳分离蛋白质,可改变各种操作参数优化分离过程。例如,调节pH值可改变荷电量Z,调节凝胶浓度可改变迁移率,调节电压可改变电泳速度等。因此,选择适当的操作条件,可进行各种蛋白质的分离。 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理是SDS能和蛋白质结合并使蛋白质带有大量的负电荷,大大超过其原来所带电荷,从而使各天然蛋白质分子间的电荷差别消除,同时蛋白质的结构也在SDS作用下变得松散,形状趋于一致,排除了电泳过程中电荷的影响,使SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳时,蛋白质迁移率的差异仅是相对分子质量的函数。 2.3 等电点聚焦 a)原理 一般的区带电泳利用溶质迁移率的差别进行分离,而等电点聚焦(IEF)利用蛋白质和氨基酸等两性电解质具有等电点,在等电点的pH下呈电中性,不发生泳动的特点进行电泳分离。在电泳设备中首先调配连续的pH梯度,然后使蛋白质在电场作用下泳动到等于各自等电点的pH区域,从而形成具有不同等电点的蛋白质区带。 2.4 二维电泳 二维电泳同时利用分子的大小和等电点这两种性质的差别进行蛋白质等生物大分子的分离,即普通凝胶电泳和IEF结合,因此分离效率更高。 结晶 结晶操作:条件,影响因素to 工业结晶器类型 结晶的生长:扩散过程,表面反应过程to 结晶:概念,特点to 饱和度,介稳区,晶核形成 分子蒸馏: 分离原理和特点to 第一节 结晶的基本理论 结晶与沉淀相像,但结晶产生的颗粒具有规则的形状和大小,而沉淀则得到无定型的固体物。 1.1 基本概念 晶体:溶液中的溶质在一定条件下,因分子有规则的排列而结合成晶体,晶体的化学成分均一,具有各种对称的晶体,其特征为离子和分子在空间晶格的结点上呈规则的排列。 结晶:固体物质以晶体状态从蒸汽,溶液或熔融物中析出的过程。 结晶过程的特点: ①只有同类分子或离子才能排列成晶体,因此结晶过程有良好的选择性。 ②通过结晶,溶液中大部分的杂质会留在母液中,再通过过滤、洗涤,可以得到纯度较高的晶体。 ③结晶过程具有成本低、设备简单、操作方便,广泛应用于氨基酸、有机酸、抗生素、维生素、

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