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里氏木霉QM9414尿嘧啶缺陷型转化体系改进和
第 67 卷 第 6 期 化 工 学 报 Vol.67 No.6
2016 年 6 月 CIESC Journal June 2016
DOI ：10.11949/j.issn.0438-1157
里氏木霉QM9414 尿嘧啶缺陷型转化体系改进和
β-葡萄糖苷酶的过量表达
1,2 2 1 2
钟立霞 ，钱远超 ，戴美学 ，钟耀华
1 2
（山东师范大学生命科学学院，山东 济南 250014 ； 山东大学生命科学学院，微生物技术国家重点实验室，山东 济南 250100 ）
摘要：里氏木霉是广泛应用于纤维素酶生产的工业真菌，但高产突变株遗传操作困难，限制了菌种改良。首先利
用定点整合策略敲除里氏木霉突变株 QM9414 的pyr4 基因，成功构建尿嘧啶营养缺陷型菌株 QP4，其遗传转化效
率显著提高，而且产酶能力不受影响。进一步在 QP4 中过量表达 β-葡萄糖苷酶（BGL ）基因bgl1，经大量平板显
色筛选获得 2 株 BGL 活力明显增强的工程菌 QPB4 和 QPB5，其酶活分别提高 10.01 倍和 8.26 倍。利用发酵酶液
对 2 种不同预处理的玉米芯底物进行水解糖化实验，结果显示以酸处理玉米芯为底物时 QPB4 和 QPB5 的葡萄糖
得率比QP4 分别提高60.98%和52.44%，而以脱木素处理玉米芯为底物时其葡萄糖得率分别提高 80.01%和 86.00%。
研究表明改进里氏木霉高产突变株遗传转化体系可以显著促进菌株改良，提高糖化应用效果。
关键词：纤维素酶；里氏木霉高产突变株；遗传转化；水解糖化；尿嘧啶营养缺陷型标记；构建和表达；生物技
术；生物工程
中图分类号：TQ 812 文献标志码：A 文章编号：0438—1157 （2016 ）06—2510—09
Improvement of uracil auxotrophic transformation system in Trichoderma reesei
QM9414 and overexpression of β-glucosidase
1,2 2 1 2
ZHONG Lixia , QIAN Yuanchao , DAI Meixue , ZHONG Yaohua
1 2
( College of Life Sciences, Shandong Normal University, Jinan 250014, Shandong, China; State Key Laboratory of Microbial
Technology, School of Life Sciences, Shandong University, Jinan 250100, Shandong, C
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