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以肽为分子识别物质的新型电化学发光生物传感方法的研究毕业论文 目 录 摘 要 I Abstract III 第一章 引言 1 1.1 肽 2 1.1.1 肽的概述 2 1.1.2 肽应用于生物传感的来源 2 1.2 以肽为分子识别物质的生物分析法研究进展 11 1.2.1 荧光光谱法 12 1.2.2 电化学方法 15 1.3 电化学发光分析法 17 1.3.1 电化学发光分析法概述 17 1.3.2 电化学发光生物分析法研究进展 21 1.4 本论文的研究目的及意义 26 第2章 以肽为分子识别物质的均相电化学发光法检测心肌肌钙蛋白I 28 2.1 引言 28 2.2 实验部分 40 2.2.1 仪器与试剂 40 2.2.2 电化学发光探针的制备 41 2.2.3 电化学发光检测cTnI 41 2.3 结果与讨论 42 2.3.1 电化学发光探针的表征 42 2.3.2 电化学发光探针对cTnI的电化学发光响应 42 2.3.3 实验条件的优化 45 2.3.4 线性范围和检出限 46 2.3.5 选择性 47 2.3.6 样品分析 48 2.4 结论 49 第3章 以肽为分子识别物质的电化学发光生物传感器检测活性前列腺特异性抗原 51 3.1 引言 51 3.2 实验部分 52 3.2.1 仪器与试剂 52 3.2.2 电化学发光探针的制备 53 3.2.3 电化学发光生物传感器的制备 54 3.2.4 电化学发光检测PSA 55 3.3 结果与讨论 55 3.3.1 电化学发光探针的表征 55 3.3.2 电化学发光肽生物传感器对PSA的电化学发光响应 56 3.3.3 实验条件的优化 57 3.3.4 电化学发光肽生物传感器的性能 59 3.3.5多路复用生物传感器检测博来霉素和PSA 64 3.4 结论 65 结 论 67 参考文献 69 致 谢 87 攻读硕士期间主要研究成果 89 第一章 引言 心脏病等疾病正在严重威胁着人类的生命，其发病率在全球范围内呈现不断上升的趋势，研究病源、基因和药物以便于建立简单、特异、敏感和快速的病源、基因和药物检测方法，这对于早期预防、诊断和治疗疾病具有极其重要的意义。生物传感器[1]是由生物分子识别元件如酶、抗体或单链DNA等与适当的信号转换元件偶联构成的分析器件，具有选择性好、灵敏度高、分析速度快、成本低、操作简单等优点，是现代分析检测的重要工具。在生物传感器分子识别元件中，酶和抗体的制备比较繁琐、固定时和保存时间过长均易失活、使用时对环境和样品条件的要求也比较高。DNA生物传感器是指固定在基体表面的探针DNA分子与样品中的靶DNA进行杂交，通过检测探针分子的杂交信号，进而获取靶DNA的相关信息。近年来，通过指数富集配基的系统进化技术筛选得到的寡核苷酸肽，不仅具备类似抗体对靶分子的高亲合力、高特异性、分子量小、结构简单、易合成和可进行连接性修饰等特点，而且可反复使用和长期保存，在疾病诊断的检测方面受到人们的关注。但因目前筛选的适体链种类较少，使用范围受到限制。探索具有高特异性高稳定性的新型生物分子识别元件，建立高选择型高灵敏度的生物传感新技术是当前分析化学研究所面临的一项具有挑战性的任务。利用噬菌体展示技术合成的肽与抗体相比，具有高的亲和性，极强的生物活性和多样性，且分子量小，易于改造，易于化学合成，价格低廉，可在极端条件下使用，无毒副作用等优点，已作为分子识别物质在生物传感器的研制方面得到人们的广泛关注。 电化学发光[2]是化学发光和电化学相结合的产物，集成了发光分析高灵敏度、线性范围宽和电化学电位可控性、选择性好等优点，引起了分析化学工作者广泛的关注。本论文的引言部分拟1.1 肽 1.1.1 肽的概述 肽是由两个或两个以上氨基酸通过肽键共价连接形成的聚合物，组成蛋白质的20个天然氨基酸以不同的组成和排列方式构成不同的肽类。氨基酸的不同侧链对肽的生化模式起着重要的作用。肽按其组成氨基酸的数目分为不同的种类：通常由2-10个氨基酸组成的肽称为寡肽小分子肽10-50个氨基酸组成的肽称为多肽含有50个以上氨基酸残基的肽衍生物则被归类于蛋白质[3]。所以从本质上来说，蛋白质与肽均是由氨基酸分子构成的，只是构成分子的数量不同而已。由于肽是介于氨基酸和蛋白质之间的一类化合物，所以许多肽也具有氨基酸和蛋白质所没有的新功能。 肽存在于生物体内的浓度很低，血液中一般仅为10-10mol/L，但生理活性很强，在调节生理功能起着重要的作用[4]。近几十年以来，肽在人体中所起的作用已逐渐引起科学界的高度重视。大量的研究结果表明，蛋白质摄入后大部分以肽的形式吸收，并不是完全水解成氨基酸，同时发现，肽被吸收的速度比相同组成的氨基酸分子要快。而且肽类药物的主要特点是用量小生物活性强，对自身免疫