应用多肽毒素探针研究离子通道的结构及功能.pdf

密级 学校代码 10542 学号2Q!!Q!!垒Q152 应用多肽毒素探针研究离子通道的 结构和功能 The of investigation ofionchannels relationship byusingpeptide toxinsas probes 指导教师姓名、职称 苤塞±塾撞型主生熬撞 湖南师范大学学位评定委员会办公室 二零一四年十月 万方数据 IllIlI rIIIJllullillM llllJfillIIj 中文摘要 专一性作用于电压门控钠离子通道的天然多肽毒素可作为研究通 道结构与功能关系的分子探针。本研究从雷氏大疣蛛和敬钊缨毛蛛 毒液中分别鉴定到了两个新的小分子多肽：作用于钠通道亚型 肽毒素作为分子探针，我们分别对Na，1．3通道晚期钠电流的形成机 制以及细菌钠通道上的保守神经毒素作用位点作了深入的探讨。 在本文的第二章，我们利用RTX-VII作为分子探针研究了Na，1．3 通道的四个结构域在晚期钠电流产生中的作用。RTX-VII是一个35 为4072．68 的连接模式形成四对二硫键。对各哺乳动物钠通道亚型进行活性分 诱导通道产生大的晚期钠电流。但高浓度RTX—VII对Na，1．4，Na，1．5， Na，1．7通道和DRGTTX—R钠通道的电流都没有影响。提示RTX—Vll 具有较好的钠通道亚型选择性。RTX-VII浓度依赖性的诱导Na，1．3 nM。毒素结合到 通道的晚期钠电流，其半数有效浓度(EC。。)约为120 Na，1．3通道和毒素从Na，1．3通道上的洗脱都较慢，其结合时间常数 S。 和洗脱时间常数分别为40．9±11．3S和162．8±39．7 强去极化电压下不影响通道的峰电流。毒素处理后Na，1．3通道的峰 电流和晚期钠电流具有相同的激活动力学。RTX—VII使Na，1．3通道 的激活动力学向超极化方向漂移，对通道失活的电压依赖性不产生 影响，但毒素在失活曲线上诱导了一个稳态成分。与许多Alpha蝎 毒类似，RTX-VII与Na，1．3通道相互作用表现出电压依赖性的解离 和重新结合。RTX-VII从Na，1．3通道上解离具有电压和时间依赖性， 而毒素重新结合到Na，1．3通道上只具有时间依赖性。毒素基本不影 响NaA．3通道的失活后恢复动力学。 RTX—VII抑制海马神经元钠通道的失活提示毒素可能引起中枢神 经系统超兴奋，小鼠侧脑室注射毒素证实了这一假设。随后我们以 Na，1．3通道和海马神经元钠通道作为模型研究了RTX—VII引起小鼠 中枢神经系统兴奋性中毒的原因。RTX-VII激活了Na，1．3通道在不 同速率的斜坡电压下的电流，并导致斜坡电流第一个峰向超极化方 万方数据 向漂移。同时，我们的研究发现RTX—VII同步增强Na，1．3通道的晚 期钠电流和斜坡电流的第二个峰，这两种电流成分存在紧密的线性 的斜坡电流产生了与对Na，1．3通道的斜坡电流类似的影响，包括