开口箭皂苷提取优化和其对关节炎小鼠的治疗研究.pdf

THEIIESEARCH0FEXTRACTION OF OPTIMIZATIONTUPISTRACHn町ENSIS BAK AND SAPONINSITSEFFECTON RHEUMATOIDAI汀HRITISMICE ADissertationSubmittedto theGraduateSchoolofHenanNormal University inPartialFulfillmentofthe Requirements forthe of Degree MasterofScience By Le Liang Supervisor：Prof．WangWensheng 2015 May 摘要 百合科铃兰族开口箭属开口箭中含有多种生物活性成分，这些生物活性成分都具有 许多生物功能，其中最主要的成分是甾体皂苷，甾体皂苷已被证明具有抗炎、抗肿瘤、 祛痰和镇痛等多种作用。因此对皂苷的提取方法进行探讨优化，获取最佳提取工艺是很 有意义的。然而皂苷的提取方法仍不够完善，需要进一步进行探索，本实验就采用了多 种处理方法相结合的方式探讨了皂苷的最佳获取工艺，为皂苷的提取优化提供了参考。 类风湿性关节炎属于疑难杂症之一，西药治疗该疾病存在着成本高、副作用大等缺 点，中药治疗就逐渐成为人们关注的焦点。开口箭中的皂苷在抗炎方面也具有相应的疗 效，本实验就研究了用我们所探讨的最佳皂苷提取工艺所获取的皂苷对关节炎小鼠的治 疗效果。该研究为开口箭皂苷在关节炎症治疗方面打下了铺垫，为开口箭皂苷最终应用 于人类类风湿性关节炎的治疗奠定了基础。 本研究先用物理和化学方法鉴定了开口箭的主要生物活性成分，得知开口箭中含有 甾体皂苷、黄酮类物质、生物碱和挥发油类成分，而不含酚类和鞣质以及蒽醌类物质。 随后又对开口箭皂苷的提取方法进行了探讨。实验首先分别用双蒸水(DDW)溶 解开口箭粉末或95％乙醇溶解开口箭粉末，然后又用电磁炉加热法、微波炉加热法或超 声波破碎法对开口箭溶解液进行处理，接着用石油醚萃取法或乙醚萃取法进行脱脂萃取， 最后都用水饱和正丁醇进行深度萃取，从而获得开口箭总皂苷成分，然后观察、分析和 比较了这几种方法的提取效率。实验结果显示：DDW溶解开口箭粉末比95％乙醇溶解 开口箭粉末获取的总皂苷含量多，微波炉加热比超声波破碎最终获得的总皂苷含量多， 超声波破碎比电磁炉加热获取的总皂苷含量多。石油醚萃取比乙醚萃取效果好。由此表 明最佳提取工艺为：用DDW溶解开口箭粉末，用微波炉加热处理开口箭水溶液，用石 油醚进行脱脂萃取，最后用水饱和正丁醇再次萃取。 本研究最后用第三章优化的皂苷提取流程所提取的皂苷研究了其对类风湿性关节 炎小鼠的治疗效果。实验设有正常组、类风湿性关节炎模型组和开口箭皂苷治疗组，实 验开始成功用鸡蛋清卵蛋白初次免疫，随后又用弗式不完全佐剂乳化的鸡蛋清卵蛋白再 次免疫建立起了关节炎模型，随后又用开口箭皂苷溶液进行灌胃处理，浓度为O．3 g／mL， 剂量为20 mL／kg，一天一次，连续进行两周，期间对小鼠的形态进行了观察，并在治疗 I 后测量、比较和分析了不同组小鼠后爪的体积，最后对3组小鼠的关节部位进行苏木精