5.9高效液相色谱法课件.ppt

高效液相色谱法HIGH PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY; 高效液相色谱法（high performance liquid chromatography, HPLC）又称高压液相色谱法 ; 缺点： (1) 仪器复杂、价格昂贵 (2) 使用有机溶剂 (费用较高，有害健康、污染环境);第二节 液相色谱法的分类;一、吸附柱色谱法 (adsorption chromatography);;;Ka 的大小取决于组分分子和吸附剂之间以及组分分子和流动相之间作用力的强弱 Ka 值大，表示组分在吸附剂上保留强，难以洗脱 Ka 值小，表示组分在吸附剂上保留弱，易于洗脱 ;通常，吸附等温线分为以下三种： (1) 直线形等温线 (2) 凸形等温线 (3) 凹形等温线 ;三种吸附等温线和对应的色谱峰形状; 对吸附剂的基本要求： 不与流动相和被测组分发生化学反应 有高的吸附容量 不溶于流动相等 ; 硅胶是最常用的吸附剂，由弹性多聚硅酸脱水制成，其吸附能力较氧化铝弱 ;活性基团硅醇基 ; 氧化铝 ;(3) 流动相 ;(4) 固定相和流动相的选择 ;c. 流动相的极性;氧 化 铝 上 的 洗 脱 序 列 ;在硅胶吸附剂中?0值的顺序与氧化铝相同， 数值可按下式换算： ;d. 被测组分、吸附剂和流动相的关系;二、分配柱色谱法 (partition chromatography);分离原理示意图 (反相);(2) 固定相 ;分配色谱法要求固定液是样品的良好溶剂，不溶或很难溶于流动相 最常用的固定液为：强极性的β,β-氧二丙腈、中等极性的聚乙二醇和非极性的角鲨烷等 常用的固体液涂渍方法主要有三种：溶剂蒸发法，沉淀法和动态涂渍 ;早期的固定相为机械涂层固定相 ; 按基团与硅胶相结合的化学键类型分类; 按有机基团的性质分类 ; 化学键合固定相的优点： ① 传质速度快，柱效高 ② 柱稳定性好，使用寿命长 ③ 可键合不同性质的官能团，提高选择性 ④ 可利用梯度洗脱，提高分析效率; 对流动相的基本要求： 与固定液不互溶，极性相差较大； 对样品组分的溶解度足够大，但又相对小于固定液对组分的溶解度 ;;三、离子交换色谱法 (ion-exchange chromatography);(1) 离子交换原理 ;Xm + RsY;(2) 固定相 ;按基体不同分类 ;离子交换剂的不同物理结构 (a) 微孔型; (b) 大孔型; (c) 薄膜型; (d)表面多孔型;;交联度;交换容量 (exchange capacity) ;一般来说，离子强度的 变化要大于pH值变化对 保留值的影响 ;分离原理示意图;凝胶色谱法示意图;(2) 固定相 ; 应用最多的是多孔性凝胶 根据机械强度的不同一般可分为软质、半硬质和硬质凝胶三类 软质凝胶(如葡聚糖等)在压强0.1 MPa左右即被压坏，不适宜用在HPLC中 ;对流动相的基本要求：; ;高效液相色谱仪LC-10Avp Plus; 高效液相色谱仪的工作流程 ;一、高压输液系统; 流动相的作用： (1) 携带样品通过色谱柱 (2) 提供分配相，调节选择性，实现分离; 流动相的处理：; 高压输液泵应符合要求： (1) 密封性好，耐腐蚀 (2) 有足够的输出压力—— 30~50 Mpa (3) 输出压力平稳，脉冲小 (4) 输出流量恒定，可调范围宽，流量精度1%~2% (5) 泵室体积小(＜0.5 ml ); 常用的高压输液泵分为以下两种： (1) 恒流泵 —— 输出流量恒定 (2) 恒压泵 —— 输出压力恒定 缺点：保留时间重现性差， 更换溶剂或清洗较麻烦;二、进样系统;六通阀进样示意图 a. 进样位置(样品进入定量管) b. 进柱位置(样品导入色谱柱) 1. 定量管 2. 样品进入口 3. 流动相进口 4. 色谱柱;三、分离系统;四、检测系统;1. 紫外检测器 （ultraviolet-visible detector, UVD或UV）;流通池示意图 1. 流动相出口 2. 流动相入口 3. 透镜 ; 紫外检测器的特点： (1) 灵敏度高，最小检测浓度为10-10 g/ml (2) 线性范围宽，对温度和流动相流速波动不敏感，可 用于梯度洗脱 (3) 应用范围广泛; 紫外检测器的种类; 与UVD的主要区别： 进入流通池的光是整个紫外-可见光谱