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3-2 第四章 2 载体课件
第一节 基因克隆的概念和基本步骤;Target DNA fragment; 一、什么是载体？ ;Expression Vectors;(一)、质粒 ;答：Small plasmid can avoid problems such as DNA breakage during isolation, thus we can construct recombinant DNA with ease. ;Bacterial chromosome;例1. pBR322 plasmid;元件1）复制原点;E.coli without plasmid: die;pUC19 plasmid;1）具有复制原点：自主复制
2）具有单一酶切位点,供外源基因的插入—供克隆用的位点.
多克隆位点 (Multiple Cloning sites, MCS):
多个限制性内切酶的单一酶切位点。
3）具有筛选标记基因:抗生素抗性;举例：3 个常用的克隆质粒; 例2. pUC18, pUC19;pMD18-T
2692bp;EcoRV
( GATATC);在装有7μl PCR挤胶回收产物的微量离心管内加入
(2) 10×buffer 1μl
T vector 1μl
T4 DNA Ligase 1μl
终体积 10μl 16℃过夜。;pMD18-T
2692bp;(一)、质粒 ;筛选标记;克隆载体必备元件
—复制原点
—??选标记
—克隆位点
原核基因表达必备元件
—启动子，终止子
—SD序列
(原核细胞所识别的);真核表达质粒的基本结构：;穿梭载体;pUC origin
Apmr
MCS;小结: (一)、质粒载体 ;噬菌体：感染细菌的病毒;cos;大肠杆菌;The life cycle of ?-phage:;cos;例如：?GEM11 vector ;细菌;插入型噬菌体载体：;Cos ;Ampr and Origin
in pBR322;;;TEL;哺乳动物病毒;载体小结:
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