第五章离心分离技术.ppt

离心分离技术 固液分离：第一选择为过滤，第二选择为离心分离。 应用： A、难过滤的发酵液（d小、?大、过滤v慢）、甚至不能过滤的悬浮液，及忌用助滤剂、或助滤剂无效的悬浮液； B、其他难分离的固液分离； C、互不相溶的液—液分离，如液液萃取； D、不同密度固体或乳浊液的密度梯度分离，如超离心分离 缺点： A、分离得到的不是滤饼一样的半干物，而是浆状物； B、处理量小； C、设备复杂，价格贵，分离成本高。 §5.1 离心沉降 当悬浮液静止不动时，由于重力场的作用，较大的悬浮颗粒会逐渐沉降，颗粒越重下沉越快，反之会上浮。但很小的颗粒不仅沉降速度慢，而且扩散现象严重，很难或根本无法沉降。这样就需离心的方法产生出离心力场，使之产生沉降。 ?在说明离心条件时，低速离心通常以转子每分钟的转数表示（r/min） ，如4000 rpm ； 而在高速离心时，特别是在超速离心时，往往用相对离心力来表示，如65000g。??? 4.碟片式离心机 碟式离心机是立式离心机的一种，转鼓装在立轴上端，通过传动装置由电动机驱动而高速旋转。 转鼓内有一组锥顶角为60－100度的的互相套叠在一起的碟形零件--碟片。碟片与碟片间的距离用附于碟片背面的具有一定厚度的狭条来控制，碟片的距离为０.5~2.5mm。 . 碟式分离机转鼓内有一组碟片，把转鼓空间分成许多薄层分离空间，从而大大缩短沉降距离，改善和提高分离效果。　 任何处于两碟片之间的极限颗粒若能在此路程段中到达碟片内表面，则可以被分离出来。 卧式螺旋卸料沉降离心机是利用离心沉降原理分离悬浮液的设备，它主要用于完成固液相有密度差的悬浮液的固相脱水，液相澄清，粒度分级，浓缩等工艺过程。 §5-2 离心过滤 以间歇离心过滤为例，料液首先进入装有过滤介质(滤网或有孔套筒)的转鼓中，然后被加速到转鼓旋转速度，形成附着在鼓壁上的液环。与沉降式离心机一样，粒子受离心力而沉积，过滤介质则阻止粒子的通过，形成滤饼。当悬浮液的固体粒子沉积时，滤饼表面生成了澄清液，该澄清液透过滤饼层和过滤介质向外排出。 二、离心过滤设备 基本参数 选择 颗粒d,固液?差,? 基本型号 固体物浓度 亚型 产物热稳定性 低温离心 流量Q, 规模 规格、台数 气溶胶,活cell 密封灭菌设计 包含体产物分离工艺（牛生长激素分离提取） （2）等密度离心 （Isopycnic centrifugation） 美国BECKMAN（J6系列） 超高速离心机 5、密度梯度的制备（手工、梯度混合仪、离心形成法） 预形成梯度：手工法、梯度混合仪法 此方法要事先制备密度梯度，常用的梯度介质主要是非离子型的化合物(如蔗糖、甘油等)。离心时把样品铺放在梯度介质的液面上，这个密度包括了所需要研究的密度范围，直到粒子的漂浮密度和梯度的密度相等时，粒子才发生沉降，并排列成不同的区带。 用这一技术可以定量的从线粒体和过氧化物酶体中分离溶酶体。 (1) 阶梯梯度： 用手工由底部向上分层加入渐浓的介质溶液，由于扩散作用可自然形成连续梯度。扩散时间还受温度、阶梯厚度、阶梯密度差的影响。 (2) 混合梯度法： 借助梯度混合仪或自动梯度仪，可自动调节梯度斜率、形状、浓度，还可同时制备几个梯度。制成的梯度放置过久，梯度形状、斜率会变化。 梯度混合器 三种梯度形成示意图 a凸形梯度b线性梯度 c 凹形梯度 High density solution Low density solution 自形成梯度：（3）离心平衡法 自形成梯度的等密度离心(平衡等密度离心)。平衡等密度离心常用的梯度介质有离子型盐类如铅盐或铷盐和三碘化苯衍生物等。离心时是把密度均一的介质溶液和样品混合后装入离心管中，通过离心自形成梯度，让粒子在梯度中进行再分配。离心达到平衡后，不同密度的粒子在梯度中各自分配到其等密度点的特定位置上，形成不同的区带。 四、离心操作 (一)加样和离心： 1. 样品准备： 离心前先除去样品中大颗粒和胶状不溶物。 要求样液密度梯度最大值（速度区带离心）。 样液中含有低浓度盐（如0.2M NaCl）可消除组分颗粒间电荷影响（减慢速度降低分辨率）。