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一、神经解剖学常用的几种神经束路追踪 BDA(生物素葡聚糖胺 )是一种与生物素结合的多聚葡聚糖胺(dextran-amines DA),适用于长传导束追踪。相对于HRP与其它以前所用的神经示踪剂, BDA具有生物性稳定,经处理的标记组织标本可以保存6个月以上而不影响最终结果。生物素标记的葡聚糖胺（BDA）在细胞外注射后，可以被神经元及其突起摄取，然后顺行或逆行沿轴突转运至远处，可清晰地显示皮质脊髓束在整个中枢神经系统中的位置及走行。 将大鼠通过腹腔注射3.6%水合氯醛麻醉后，去头部毛，钻开两侧颅骨，暴露两侧大脑皮质，安装好立体定位仪，将大鼠头部固定，用1μl的微量进样器抽取0.5μl 10%BDA后将其固定在定位仪上，进样器针的斜面（1.5mm长）朝向自己。每侧暴露的大脑皮质上有四个注射位点，在插入皮质后5min内推完BDA，然后停针5min，最后缝合皮肤。 HRP逆行追踪 HRP是应用较多的神经示踪剂，既可以逆行追踪，也可顺行追踪，近年来还发现其能进行跨节追踪从而使HRP能更精确地研究神经纤维的再生，而CTB-HRP在神经细胞内的降解速度较慢，动物存活时间稍长也不会影响标记物的数量 . HRP法的主要操作步骤：麻醉动物，在神经系统内注入HRP，动物存活一定时间，灌注固定，取材切片，组织化学反应和显微镜观察。 本实验主要将霍乱毒素B结合的HRP注入坐骨神经末梢，末梢摄取HRP后，逆行运至脊神经节细胞，再进一步经中枢突顺行运输至脊髓后角的感觉神经元胞体，最后通过感觉神经元胞体的中枢突向脊髓上方运输。 tSCI后56d,即在处死大鼠前３d，用微量注射器将１﹪cholera toxin B-subunit（CTB－HRP，来自sigma）沿两侧坐骨神经两断端的上端注入神经鞘膜下的神经束内，每侧注射剂量为１uL以进行追踪。 ３d后麻醉大鼠， 从左心室插管至升主动脉，先冲洗血管，然后灌入4%多聚甲醛，取材时在脊髓tSCI处上下保留０.５cm的情况下，取下２cm长的一段脊髓，随后入灌注液再固定１２h以上，再入20%蔗糖液脱水3d-5d直至沉底。将取下的这段tSCI处的脊髓作纵向切片（即切片方向与长轴一致），片厚35um，切片后置于PBST中。 脑干功能 角膜反射：角膜反射是以棉花轻触一侧眼球的角膜，引起双眼闭合。其反射通路是：角膜→三叉神经的眼神经→三叉神经脑桥核及脊束核→两侧面神经核→两侧面神经→两侧眼轮匝肌。刺激一侧眼球角膜，可引起两眼闭合，其中刺激侧的反应称直接角膜反射，未刺激侧的反应称间接角膜反射。2．咽反射： 咽反射是用压舌板轻触咽后壁，引起软腭或腭垂上提及呕吐的动作。其反射通路是：咽后壁→舌咽神经及迷走神经→孤束核→疑核→舌咽神经、迷走神经→软腭肌、咽肌。该反射弧任何一部分受损，咽反射即消失，如其中的传出神经受损，还伴有患侧软腭低于健侧、腭垂偏向健侧、吞咽困难、呛咳等。3．瞳孔对光反射：见视觉传导路。 脑干的纵向区分： （二）脑干内部结构 延髓橄榄中部横切面 General Somatic Motor Nucleus 躯体运动核 Soecial Visceral Motor Nucleus 特殊内脏运动核 3、Nucleus Ambiguus 疑核 General Visceral Motor Nucleus 一般内脏运动核 Visceral Afferent Nucleus内脏感觉核 General Somatic Afferent Nucleus 一般躯体感觉核 Soecial SomaticAfferent Nucleus 特殊躯体感觉核 （２）非脑神经核： 2）Inferior Olivary Nucleus 下橄榄核： 3）Pretectal Region 顶盖前区（ Pretectal Nucleus 顶盖前核）： （２）脑桥的非脑神经核：Pontine Nucleus 脑桥核： １）下丘：中央核及周边灰质 5）Substantia Nigra 黑质 2、白质 2）Spinothalamic Tract 脊髓丘脑束： 4）Ventral Spinocerebella Tract 脊髓小脑前束、 Dorsal Spinocerebella Tract 脊髓小脑后束： 5） Lateral Lemniscus 外侧丘系与Trapezoid Body 斜方体： （2）下行纤维束： Corticonuclear Tract 皮质核束： 3、Reticular Formation of Brain Stem 脑干网状结构： （1）网状结构的主要核团： （1）上行纤维