2011第二章_固相萃取技术.pptVIP

柱色谱实验 当加入的洗脱剂流下时，由于不同化合物吸附能力不同，因而以不同的速度沿柱向下流动，继续洗脱时，吸附能力弱的组分随溶剂首先流出。在连续洗脱过程中，不同组分或不同，色带就能分别收集，从而达到分离纯化的目的。 1 、吸附剂 常用的吸附剂：氧化铝，硅胶，氧化镁，碳酸钙，活性炭或纤维素粉。 选择吸附剂的首要条件：不与被分离物或展开剂发生化学反应。 吸附能力与以下几点有关： （1）吸附剂颗粒大小 （2）吸附剂含水量 2 溶剂 通常根据被分离物中各组分的极性、溶解度和吸附活性等来考虑。 先将带分离的样品溶于尽量少的非极性溶剂中，从柱顶流入柱中，依次增大溶剂的极性，将不同化合物依次洗脱。 常用洗脱剂的极性： 石油醚＜ 环己烷＜ 四氯化碳＜ 甲苯＜ 苯＜ 二氯甲烷＜ 氯仿＜ 乙醚＜ 乙酸乙酯＜ 丙酮＜ 乙醇＜甲醇＜水＜ 乙酸 三、实验步骤及注意事项 1、在玻璃色谱柱(d=1cm,l=10cm)底部用脱脂棉轻轻塞紧 ,称取 4g 硅胶于小烧杯中 ,加入 15mL蒸馏水 ,用玻璃棒调好。 2、在柱中先加入1/2 柱高的蒸馏水 ,打开活塞 ,在搅动下把糊状硅胶加入柱中 ,同时调整活塞使流速为1滴/s。 3、当柱中液面将要露出硅胶面时 ,加入 5mL左右的A 液 ,当硅胶面又将要露出时 ,关紧活塞 ,用移液管准确加入 0.50mL以A液做溶剂的混合液(含甲基橙和亚甲基蓝各为0.400g·L-1) 。 H2O∶95 %乙醇 = 1∶1 (A 液) 0.2mol· L-1HCl∶ 95 %乙醇 = 1∶1 (B 液) 。 4、待此混合液将要渗入柱内时 ，立即用 A 液洗脱 ，此时可以观察到有鲜明的黄、 蓝两条色带形成。黄色的甲基橙色带随洗脱剂的加入不断下移 ，而其顶部蓝色带不移动 ，当黄色带到达柱底部时 ，更换接受器 ，全部收集此黄色带 ，洗脱时间约 10 min。 5、此后改用B 液做洗脱剂 ，这时可看到蓝色带开始下移 ，当亚甲基蓝色带到达底部时 ，更换接受器 ，全部收集此蓝色带 ，洗脱时间约 30 min。 【洗脱时切勿使溶剂流干！ 】 使用过的吸附剂倒入垃圾桶里，切勿倒入水槽，以免堵塞水槽 习题 固相萃取包括哪几个步骤？ 柱色谱（柱层析）实验过程中的注意事项有哪些？ 正相型和反相型固相萃取中常用溶剂的极性大小（P32） 1.固相萃取吸附剂的选择-固相萃取吸附剂的要求 固相萃取吸附剂最好为多孔的、具有大的表面积的固体颗粒。 固相萃取吸附剂应有较低的空白值。 萃取吸附过程必须可逆且有高的回收率。 固相萃取吸附剂要有高的化学稳定性。 固相萃取吸附剂必须与样品溶液有好的界面接触。 键和硅胶吸附剂 石墨碳 离子交换树脂 金属配合物吸附剂 聚合物吸附剂 免疫亲和吸附剂 分子嵌入聚合物 1.固相萃取吸附剂的选择-常用固相萃取吸附剂 键和硅胶吸附剂 常用的键合硅胶吸附剂表面积在50～500m2/g 之间，孔径为5～50nm ，粒径大于40μm 。一般应选择粒径小、比表面积大的吸附剂，以获得更好的萃取效果。但要注意若粒径过细，萃取时阻力增加，萃取速度下降。 1.固相萃取吸附剂的选择 应根据分析对象、检测手段及实验室条件合理选择。 2.固相萃取溶剂的选择 在固相萃取固定相活化、上样富集、淋洗杂质、分析物洗脱过程中，都涉及到溶剂选择问题。 a.固定相活化溶剂的选择 一般使用两种活化溶剂。第一种溶剂（初始溶剂）用于净化固定相，对于常用的C18键和硅胶固定相，可用甲醇有效地除去其所含杂质。第二种溶剂（终溶剂）使固定相溶剂化，以便样品中的分析物能更好的保留。 b.上样萃取溶剂的选择 为了使分析物更好地保留在固相萃取柱上，上样萃取时应采用尽可能弱得溶剂。 c.淋洗溶剂的选择 淋洗溶剂用于洗去吸附在固定相上的干扰组分。淋洗溶剂的强度选择非常重要，其强度不能太高，也不能太低，应大于或等于上样溶剂，又小于洗脱溶剂。淋洗溶剂的选择原则：尽可能将干扰组分从固定相上洗脱完全，但又不能洗脱任何分析物。 溶剂强度应足够大，以保证吸附在固定相上的分析物定量洗脱下来。 选择的洗脱溶剂应与后续的分析相适应。 选择粘度小、纯度高、毒性小并与分析物和固定相不发生反应的溶剂。选择单一溶剂效果不理想时，可以考虑使用混合溶剂进行洗脱。 d.洗脱溶剂的选择 3.固相萃取的应用 固相萃取在环境分析的应用---多环芳烃、农药残留等有机污染物的检测。 固相萃取在生物样品分析中的应用---生物检材中毒物和药物残留分析、血液中药物分析和药物动力学研究。 固相萃取在食品分析中的应用 1）固相萃取测定生物检材中安眠酮（导数紫外） 2）双柱富集固相萃取测定钯、锶（FAAS） 3）固相萃取富集水中多环芳烃（HPLC) 4）固相微萃取富集多环芳烃GC-MS 柱层析法：是分离，纯化和鉴定有机化 合物的