原创力文档- 1、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。。
- 2、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击 这里二次下载。
- 3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
- 4、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
- 5、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 6、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 7、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次， 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
查看更多
中国食物与营养 2012，18(6)：36—38
FoodandNutritioninChina
北京棒杆菌高丝氨酸脱氢酶基因的
克隆与表达产物活性测定
刘 嘉 ，闽伟红 ，许金坤 ，方 丽
(吉林农业大学食品科学-q-工程学院，长春 130118；
小麦和玉米深加工国家工程实验室，长春 1jO118)
摘 要：以北京棒杆菌E51染色体DNA为模板 ，用PCP．法扩增 了高丝氨酸脱氢酶 (HD)基因。将结构基因装载
于pET一28a质粒的T7启动子下游 ，得到了重组表达质粒pET—HD。将其转入大肠杆菌 (E．colOBL21(DE5)，经异丙基
硫代半乳糖苷 (IPTG)诱导 ，获得 了高效的表达。含表达质粒的茵体胞内粗提液经酶活分析表明，高丝氨酸脱氢酶的
活性为不含重组质粒的对照茵的 10倍 。
关键词 ：高丝氨酸脱氢酶 (HD)；PC；基因表达
蛋氨酸是唯一含硫必需氨基酸，在食品和饲料等工 Primer2：CCC丛 TTCAAGCCAGATGGA芦(IAA
业中应用广泛 J。自20世纪50年代成功采用微生物生 HindIII
产谷氨酸以来，人们利用发酵法已经成功生产22种氨基 1．1．2 菌种和质粒
酸。蛋氨酸因其生物合成受到严格的反馈抑制和反馈阻 菌种和质粒特征及来源见附表。
遏作用，是唯一 种不能采用深层发酵而工业化生产的 附表 菌种和质粒
氨基酸。近年来国内外学者投入较大精力进行蛋氨酸菌
种选育 J，以实现生物发酵法进行蛋氨酸产业化生产。
棒杆菌中蛋氨酸的生物合成途径，影响蛋氨酸生
物量积累的第一个关键酶天冬氨酸激酶 (AK)为别构
酶，它的活性受支路代谢产物赖氨酸和苏氨酸及其协
同反馈抑制 。而高丝氨酸脱氢酶 (HD)是蛋氨酸生物
合成途径中第二个关键酶，亦为别构酶，受苏氨酸的
反馈抑制，为蛋氨酸所阻遏，编码基因为hom，提高
HD活性并解除苏氨酸的反馈抑制对促进蛋氨酸生物合
成具有重要意义 。本试验 旨在将北京棒杆菌E3l基因
组中高丝氨酸脱氢酶基因进行克隆，使其在大肠杆菌 1．1．3 主要药品与试剂
(E．coli)中进行表达，为今后获得高产蛋氨酸的谷氨 限制性内切酶、T4DNA连接酶，均购 自MBI公司；
酸棒杆菌基因工程菌打下基础 。 核酸及蛋白电泳Maker，购 自宝生物；溴．4-氯一3-吲哚
一 p—D一半乳糖苷 (x—ga1)、异丙基硫代一p-D一半乳糖苷
1 材料与方法
(IPTG)、氨苄青霉素钠 (Ampicillin)、卡那霉素、丙烯酰
1．1 材料 胺、双丙烯酰胺、SDS等，均购 自北京鼎国生物；胶回
1．1．1 PCR引物 收试剂盒，购 自上海杰瑞；质粒抽提试剂盒，购 自北京
Primer1：CG △△TTCGCTGGGAAGGTGAAT 天泽恩；westen-blot抗体，购 自BD公司；培养基、各种
ECOR I 缓冲液及各种试验试剂的配制参照TaKaRa公司参考书
和蛋白质技术手册 J。
作者简介：刘嘉 (1986 )，男，辽宁省锦卅l市人，硕士，发酵工程专业，研究方向为发酵微生物的选育与代谢调控 。
通汛作者：闵伟红 (1971 )，女，吉林省大安市人，教授，博士生导师，主要从事发酵工程、粮油科学与深加工技术研究。
38 中 国 食 物 与 营 养
文档评论（0）