蒙药冷蒿遗传多样性随机引物多态性研究.docVIP

蒙药冷蒿遗传多样性随机引物多态性研究摘要：目的研究内蒙古通辽地区蒙药冷蒿的遗传特异性及通辽、呼和浩特、锡林郭勒3个不同地区蒙药冷蒿的遗传多样性。方法采用随机引物多态性(RAPD)方法，从17组RAPD引物中筛选出13组条带清晰、多态性明显并且重复性好的引物用于实验，并利用Popgen32和NTSYS软件进行数据计算与聚类分析。结果①13组引物共产生的209条带中，有201条多态性带，多态位点百分率达96.17%。② 3个地区蒙药冷蒿Ht=0.238 1，Hs=0.187 4，Dst=0.050 7，地区间的Gst=0.212 9。③通过UPGMA分析，呼和浩特与锡林郭勒盟冷蒿聚为一类，通辽冷蒿单独聚为一类。结论①冷蒿具有较高的遗传多样性且不同地区差异明显。②冷蒿居群总的遗传多样性来自于居群内(78.71%)，且居群间有基因的交流。 关键词：冷蒿种群 改进CTAB RAPD 遗传多样性 蒙药冷蒿Atremisia frigida(蒙语：阿给)，又名小白蒿、菟毛蒿，菊科蒿属的小灌木，是蒙医的常用药，主要分布在内蒙古[1～3]。近年来，随着中药材标准化进一步深入，为提高中药质量和临床效果，中药材的道地性的研究越来越受到重视[4～6]。但对民族药的道地性研究甚少。长期以来，蒙药冷蒿一直在民间用于出血疾病的治疗[7]。研究发现，不同产地来源的蒙药冷蒿制炭后止血效果差异显著，而且来自荒漠草原的蒙药冷蒿制炭后活性成分的含量偏高。目前，冷蒿药材来源为野生冷蒿，随着荒漠化的进程，以及药材的大量开采，将使冷蒿变成濒危物种。为了避免野生药用植物的枯竭，势必要进行药材的规范化栽培种植(GAP)，对冷蒿遗传背景的分析，不但可以从遗传学角度观察引起冷蒿质量变异的原因，也可以为冷蒿栽培种植提供理论指导。 一、通辽居群内部遗传多样性分析本课题组采用通辽31株冷蒿样本的DNA作为通辽地区冷蒿居群内RAPD扩增的样本。 1. 居群内RAPD扩增带的多态性分析13个引物在通辽31株冷蒿样本中共扩增条带数为209，多态性条带数为180，多态位点比率为86.12%，平均每个引物扩增的DNA带数为13.8条，位点分子量范围均在200～2 000 bp之间。 2.居群内样本的聚类分析遗传相似度在0.22～0.76之间，其能够在一定程度上反应个体间DNA的差异，根据相似度计算遗传距离(本研究中各个体间遗传距离未列出)，从而利用UPMGA法进行聚类分析，得到个体间亲缘关系分枝树系图。 二、居群间遗传多样性分析呼和浩特、锡林郭勒冷蒿干药材混合均匀，随机取样进行DNA的提取，选取DNA完整性好、含盐量少，RAPD扩增结果稳定的3个不同批次的DNA样本，代表其所在居群进行遗传多样性检测和分析。鉴于居群遗传多样性指数与居群样本数相关，随机从通辽31个DNA样本中选取5个样本，进行居群间遗传多样性分析。通过对通辽居群5个样本的Nei’’ s指数、Shannon指数两个准确反映遗传多样性的数据进行t检验，所得到的t值均小于2.78(df=4,α=0.05双尾检测)，说明随机选取的样本和总样本无差异，能代表通辽地区的遗传多样性。 三、本实验是在前人对不同地区冷蒿药效差异分析的基础上，利用RAPD，探究冷蒿的遗传多样性。根据邹喻苹等对165属499种植物等位酶数据统计的结果，物种水平的多态性应在50%左右，居群水平的多样性应为40%左右，Gst应在0.17左右。崔光红等在药用肉苁蓉的遗传多样性RAPD分析中根据肉苁蓉平均多态位点百分率47.37%，2个居群多态位点分别为39.47%，35.53%，Gst=0.2545，得出荒漠肉苁蓉和管花肉苁蓉的遗传多样性降低，已经处于极度低下状态的结论。而本研究中物种水平的多态性在96.17%，居群水平所得多态性水平通辽(T)为76.08%、锡林郭勒(L)为52.63%、呼和浩特(H)为37.32%，Gst为0.212 9均高于这些平均值，所以，冷蒿在物种水平和居群水平上都有着丰富的遗传多样性。 冷蒿在北温带广泛分布;多年生小半灌木;风媒异花受粉;存在于演替的各个阶段。冷蒿有如此广泛的分布，所面临的环境差异大，个体和居群数目多，适应幅度大，基因交流频繁，因此维持遗传变异的能力强，产生新的遗传变异的机会也多，这都有利于其增加遗传多样性水平，并使之保持较高的水平，高于高等植物平均遗传多样性水平(约70%)。 由于地理位置的不同，各种环境因子各有差异，这必然会影响不同地区居群的遗传多样性水平。用Nei’’ s 指数、Shannon指数分析，通辽遗传多样性最丰富，锡林郭勒盟次之，呼和浩特最少。这与植株所在的环境有关。通辽地区41%的土地为沙沼，而且所用药材新鲜，样本量大，所以遗传多样性丰富。冷蒿作为一种风媒异花授粉的植物、在多水条件