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生化分离工程实验;助教学生： 赵有文 zhaoyouwen1987@ 刘 舒 liushude101@163.com 胡轶敏 huyimin11@163.com 危雅乐 yale.happy@163.com; 1组 李佳佳（组长） 董奇峰 吴婷婷 杨后召;菌株的优化培养;重组表达质粒转化E.coli BL21;本次试验的主要内容;目的基因的背景资料;生化分离工程实验（星期五）;生化分离工程实验（星期五）;PCR体系;;砌鸭每栖锨友蓝格这塞钒靶雷尖犊铬皱止褥毕廉泳帧况享冠匙慌涌喻榜绿生化分离工程实验2011课件生化分离工程实验2011课件; The pMAL-c2 series of vectors have an exact deletion of the malE signal sequence, resulting in cytoplasmic expression of the fusion protein. The pMAL-p2 series of vectors contain the normal malE signal sequence, which directs the fusion protein through the cytoplasmic membrane, and the fusion proteins can be exported to the periplasm;表达系统;四，配试剂;生化分离工程实验（星期五）;组氨酸???Ni-NTA;亲和作用原理;6×His/Ni-NTA亲和纯化步骤;系统原理示意图;Ni柱的清洗与保存;;第 1步：2倍体积 6 M 盐酸胍，0.2 M醋酸 第 2步：2倍体积水 第 3步：1倍体积 2% SDS（注意低温容易析出） 第 4步：1倍体积 25%乙醇 第 5步：1 倍体积 50%乙醇 第 6步：1 倍体积 75%乙醇 第 7步：5 倍体积 100%乙醇 第 8步：1倍体积 75%乙醇 第 9步：1倍体积 50%乙醇 第 10步：1倍体积 25%乙醇 第 11步：1倍体积水 第 12步：5倍体积 100 mM EDTA，pH8.0 第 13步：3倍体积水 ;直链淀粉柱的再生;生化分离工程实验（星期六）;二，蛋白纯化;系统;三，SDS—PAGE样品的制备;无细胞体系;生化分离工程实验（星期六）;管号;管号;生化分离工程实验（星期六）;生化分离工程实验（星期天）;SDS的原理;;;浓缩效应和分子筛效应