分子生物学技术检测水中病毒.PDF

维普资讯 630 中国卫生检验杂志2002 箜 鲞箜 塑 i笪!』型 虫 ! ： !竺：： ： 【综述】 [文章编号]1004—8685(2002)05--53602 分子生物学技术检测水中病毒 翁康生 陆晔 刘国星 周名权 (上海市疾病预防控制中心分子生物与基因实验室，上海 200336) [中图分类号] R123．1 [文献标识码] A 对饮用水、环境水源乃至各级污水 中污染病毒的检测，是 磁珠与病毒 RNA抽提液混合，病毒 RNA与寡核苷酸互补杂 预防控制疾病、评估水源卫生质量、环境卫生状况的一项有价 交，磁力作用下分离出磁珠，同时也得到纯化的 RNA。柱层析 值的工作。病毒的细胞培养是检测水 中病毒的方 法之一，尤 纯化法：Sephadex、CC41~l0j纤维素等层析材料，在特定的离子浓 其是对水中病毒的感染性评价，更是其他方法难 以取代。但 度下，可以吸附或洗脱核酸 ，快速去除杂质，纯化浓缩核酸样 病毒的细胞培养检测周期长，且有不少病毒 目前还难 以分离 品。抗原捕获裂解法l0j：交联或包被于固相上的特异抗体 培养 ，故难 以完全满足检测水中病毒的要求。分子生物学技 与病毒抗原结合，经洗涤，更换缓冲液，直接加热裂解病毒。获 术己逐渐应用于检测水 中病毒 ，不断有报 道对水 中污染的甲 得纯度很高的核酸。 型肝炎病毒 (HAV)、戊型肝炎病毒 (HEV)、脊髓 灰质炎病毒 3 病毒核酸的检测 (Po~ovirus)、轮状病毒 (Romvirus)、诺澳克病毒 (Norwalkvirus)、 3．1 核酸杂交检测病毒核酸 特定序列的寡核苷酸探针可 以 柯萨奇病毒 (Coxsackievirus)、腺病毒 (Adenovirus)、呼肠弧病毒 与被测病毒的核酸互补杂交，利用探针上 的标记物，产生发 (Reovirus)等等病毒的检测，并 以敏感、快速、特异等优点扩大 光、显色、放射性等显示杂交结果，检测被检病毒。核酸杂交 在这一领域 中的应用。现将分子生物学技术检测水 中病毒作 检测法达到了一定的敏感度 ，如膜杂交 ，碱性磷酸酶显色检测 一 简介 ，以供参考。 轮状病毒 ，敏感性为 106拷贝；膜杂交，32P标记，检测巨细胞病 1 浓缩水样中病毒 毒，敏感性为 l06病毒颗粒 。水中病毒浓度很低，昕以杂交 水中病毒浓度一般很低，需取大体积水样经浓缩后方可 法还不能单独直接用于检测水中病毒。如果要将其直接用于 检出。常用 的方法有沉淀法 ：向水样 中加无机絮凝剂l卜 。如 检测水中病毒 ，还需提高此检测法 的敏感性-12-13~。 目前杂交 氢氧化铝、磷酸铝和磷酸钙等 。病毒与絮凝物形成沉淀沉积 技术主要与 PER等技术串联 ，应用于检测水 中病毒 的定性、分 于滤 膜上 ，洗 脱后 得浓 缩 样 品。有 机 絮凝剂 如 聚乙二醇 型和定量等多种用途 。 (PEG)3-等，可用于体积较小，纯度要求较高的二次沉淀中。 3．2 聚合酶联反应(Pen)检测病毒核酸 PER是一项分子生物 固相滤膜吸附法 4I5J：利用硝酸纤维膜 、尼龙膜等带 电荷滤 学技术 ，在这核心技术基础上 ，演化发展 出许多新 的检测方 膜，配 以合适的pH值，如带负电荷滤膜 ，用 pH3．5及多价阳离 法，其中一些方法已用于检测水中病毒。 子等条件，使滤膜带正电荷，吸附带负电荷的病毒颗粒。使用 逆转录一PcR(RT～PER)检测法 污染水质的多种致病病 带正电荷滤膜则不需事先调节水质 pH值 ，可从大多数水中吸 毒为 RNA病毒，所 以需先将被测样品中的病毒RNA逆转录成 附病毒 ，然后用洗脱液洗脱病毒颗粒 。固相颗粒吸附法L6：将 eDNA，然后以eDNA为靶序列进行 PCR扩增反应。通过 PCR 荷电树脂、玻璃粉、羟磷石灰等 固体颗粒装柱，水样流动过柱， 特异